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枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備可以：（1）用于建立枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化體系；（2）用于其基因改造；（3）用于提高枯草芽孢桿菌生產(chǎn)性能相關(guān)研究。實(shí)驗(yàn)方法化學(xué)法化學(xué)改進(jìn)法實(shí)驗(yàn)材料枯草芽孢桿菌168試劑、試劑盒SPI培養(yǎng)基EGTASPII培養(yǎng)基檸檬酸鈉EGTA氫氧化鈉KH2PO4K2HPO4MgCl2MgSO4葡萄糖酵母膏（NH4）2SO4儀器、耗材培養(yǎng)箱培養(yǎng)皿錐形瓶紫外分光光度計(jì)接種環(huán)離心管實(shí)驗(yàn)步驟一、試劑配制1.SP鹽0.2%（NH4）2SO4，1.4%K2HPO4，0. -
酵母感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：酵母感受態(tài)細(xì)胞制備酵母感受態(tài)細(xì)胞制備可以：（1）用于建立酵母轉(zhuǎn)化體系；（2）用于酵母表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建；（3）用于酵母其他分子生物學(xué)研究。實(shí)驗(yàn)方法化學(xué)法試劑盒制備法實(shí)驗(yàn)材料釀酒酵母試劑、試劑盒YPDA液體培養(yǎng)基蒸餾水甘油二甲基亞砜儀器、耗材培養(yǎng)皿離心機(jī)離心管冰箱實(shí)驗(yàn)步驟一、試劑與耗材1.試劑細(xì)菌用-酵母提取物（Fisher）、細(xì)菌用-蛋白胨（Fisher）、葡萄糖（Fisher）、細(xì)菌用-瓊脂粉、去離子水、甘油（Sigma）、二甲基亞砜（Sigma）、聚乙二醇3350（Sigma）、醋酸鋰（Si -
農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)
氯化鈣法電轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌感受態(tài)實(shí)驗(yàn)方法原理在基因工程操作中，感受態(tài)細(xì)胞的制備和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化是一項(xiàng)基本技術(shù)。感受態(tài)是細(xì)菌細(xì)胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態(tài)。農(nóng)桿菌的感受態(tài)可用CaCl2處理而誘導(dǎo)產(chǎn)生。將正在生長的農(nóng)桿菌細(xì)胞加入到低滲的CaCl2溶液中，0℃下處理便會使細(xì)菌細(xì)胞膜的透性發(fā)生改變，此時(shí)的細(xì)胞呈現(xiàn)出感受態(tài)。制備好的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞迅速冷凍于-70℃可保存相當(dāng)一段時(shí)間而不會對其轉(zhuǎn)化效率有太大的影響。實(shí)驗(yàn)材料土壤農(nóng)桿菌LBA4404菌株試劑、試劑盒YEB液體培養(yǎng)基酵母提取物牛肉膏蛋白胨蔗 -
大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備、重組DNA的轉(zhuǎn)化、克隆篩選
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笸ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞和外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞的技術(shù)以及篩選轉(zhuǎn)化體的技術(shù)。了解細(xì)胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義。2.相關(guān)知識及原理感受態(tài)細(xì)胞（Competentcells）：受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學(xué)試劑法）的處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細(xì)胞（competentcell）。轉(zhuǎn)化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細(xì)胞株系，使受體細(xì)胞獲得新的 -
細(xì)胞專題：細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)標(biāo)簽：細(xì)胞凍存復(fù)蘇細(xì)胞凍存和復(fù)蘇可以：（1）用于生物學(xué)保種；（2）用于醫(yī)學(xué)上干細(xì)胞研究；（3）用于傳代培養(yǎng)。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)方法原理細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免 -
PCR技術(shù)可用于：（1）檢驗(yàn)感染性疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)；（2）有效檢測癌基因的突變，準(zhǔn)確檢測癌基因的表達(dá)量；（3）臨床應(yīng)用于檢測地中海貧血的基因突變。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方法PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)方法原理PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；②
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PAGE膠上蛋白質(zhì)的銀染方法有數(shù)百種，其原理相似，具體步驟各不相同。銀染為蛋白質(zhì)的非特異性染色，呈“爆炸性”反應(yīng)模式，用于蛋白定量時(shí)準(zhǔn)確性差，但其敏感度高、簡便易行，仍被廣泛應(yīng)用。下面列舉的這三種方法為常用的雙向電泳凝膠染色法，可與質(zhì)譜兼容。其中方法1敏感性zui高，方法3背景zui低、對比度好。1.Blamsilverstainingprotocol（Modified）程序溶液時(shí)間固定40%ETOH10%HAC1小時(shí)漂洗30%ETOH2×20min致敏0.02%Na2S2O31min漂洗H2O
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蛋白專題：蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot ）
蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）可以：（1）從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標(biāo)蛋白質(zhì)；（2）定量或定性確定細(xì)胞或組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)情況；（3）用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。實(shí)驗(yàn)方法底物化學(xué)發(fā)光ECL法實(shí)驗(yàn)方法原理Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。對已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測，對新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Weste
