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哺乳類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病理剖檢方法
點(diǎn)擊次數(shù):931 發(fā)布時(shí)間:2017-11-6
一、基本要求
(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景資料記錄
(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源、種類、年齡、性別、原編號(hào)、體重、臨床癥狀等。
(2)剖檢時(shí)間、地點(diǎn),麻醉方法、時(shí)間、麻醉者,處死方法、解剖者、記錄人、溫度、濕度。
(3)其他指標(biāo):動(dòng)物剖殺前禁食(不禁水)時(shí)間一致,為12h。
(二)體表檢查
一般用于組織學(xué)取材的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剖殺前應(yīng)先隔離檢疫7~10d,用于實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物的病理剖檢視不同動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的要求而定。剖檢前的體表檢查項(xiàng)目如下:
1、發(fā)育狀態(tài)
體格發(fā)育是否與年齡、品種相稱,各部發(fā)育比例是否正常,有無(wú)畸形。
2、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)
豐滿還是消瘦,檢查時(shí)可用手撫摸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背、腰部,營(yíng)養(yǎng)良好時(shí),背腰部厚實(shí),皮膚彈性好。營(yíng)養(yǎng)不良時(shí),背腰部椎骨突出,肋骨明顯。
3、精神狀態(tài)
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的自主活動(dòng)、運(yùn)動(dòng)情況,對(duì)外界的反應(yīng)(遲鈍或亢進(jìn))、步態(tài)如何。
4、感覺器官
眼睛的瞳孔是否清晰等,有無(wú)分泌物,眼瞼有無(wú)發(fā)炎及紅腫,球結(jié)膜顏色變化,有否潮紅、蒼白、黃染或發(fā)紺。
5、呼吸系統(tǒng)
呼吸動(dòng)物如呼吸次數(shù)、節(jié)律、有無(wú)呼吸困難;上呼吸道檢查如鼻腔分泌物多少、有無(wú)噴嚏和咳嗽;必要時(shí)可通過(guò)聽診檢查肺部。
6、消化系統(tǒng)
采食與飲水觀察,包括食欲廢絕、減退、亢進(jìn)和異嗜,口腔黏膜顏色和氣味。有無(wú)嘔吐、腹瀉、便秘,肛周有無(wú)污物,糞便數(shù)量、硬度、顏色、氣味等。
7、被毛和皮膚
檢查皮膚顏色、溫度、彈性、有無(wú)創(chuàng)傷、膿瘍、疥癬、濕疹,毛發(fā)色澤、疏密、有無(wú)脫落。
(三)病理取材基本要求
(1) 病理檢查應(yīng)分層次進(jìn)行,先進(jìn)行一般外觀觀察,然后剖檢觀察,再進(jìn)行光鏡詳細(xì)檢查。
(2) 通常選擇正常與病變交界處組織,即包括病變本身及病變周圍組織。
(3) 對(duì)照組動(dòng)物相同器官取材時(shí),選材部位應(yīng)盡量一致。
(4) 肉眼看不到的明顯病變時(shí),各試驗(yàn)組選取標(biāo)本位置應(yīng)一致。
(5) 所選組織應(yīng)包括臟器全部層次結(jié)構(gòu)或重要結(jié)構(gòu),如腎應(yīng)包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂。
(6) 體積大和分葉的器官,應(yīng)視不同組織選取多個(gè)部位,小器官可整體取材并固定,如淋巴結(jié)、扁桃體、甲狀腺等。
(7) 胃腸標(biāo)本應(yīng)將內(nèi)容物沖洗掉,以免內(nèi)容物影響組織固定,產(chǎn)生自溶。
(8) 所取材料應(yīng)盡量保持肉眼標(biāo)本的完整性,不宜過(guò)厚或過(guò)薄,一般厚約3~5mm,大小為1.5~2cm2。
(9) 切取組織時(shí)不要擠壓,使用鋒利刀具,少用剪刀,勿選用被器械鉗壓過(guò)的部位。
(10)標(biāo)本取材要熟悉,盡可能快的完成整個(gè)過(guò)程,特別是易自溶的組織,如腸道、腦、腺體等。
(11)剖檢記錄應(yīng)客觀、詳細(xì),用形象描述而不能用診斷的病名來(lái)代替。
(12)同一實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物應(yīng)交叉剖檢,嚴(yán)格統(tǒng)一各種條件和操作,盡量避免各種可能的干擾因素。
二、病理剖檢基本操作
(一)常用器械及使用方法
1、解剖刀
主要用于切開和分割軟組織,刀片宜用血管鉗(可持針鉗)夾持安裝,避免割傷手指。
常用的持刀法有以下4種:執(zhí)弓式、抓持式、執(zhí)筆式、反挑式。
2、手術(shù)剪
用于分離與剪開
3、血管鉗
用于分離和鉗夾組織,鉗夾縫合針和布巾等。
4、手術(shù)鑷
用于夾持組織,以利于解剖和縫合。
5、拉鉤
用于牽引和暴露
(二)基本操作
1、切開
在同一平面上時(shí),先繃緊組織,將刀刃與平面垂直,用力要得當(dāng),一次垂直切開,切口整齊而不偏斜,禁止斜切和鋸切,以減少損傷。切開多層組織時(shí),一般應(yīng)按組織層次分層切開,避免損傷深層組織器官。
2、組織分離法
可用銳性分離法,使用刀、剪等銳性器械直接切割,如皮膚、黏膜、精細(xì)結(jié)構(gòu)和緊密連結(jié)組織的分離;也可用鈍性分離法,使用分柄、止血鉗、剝離器,手指等分離,如肌肉,疏松結(jié)締組織等的分離。
3、結(jié)扎
用絲線打結(jié)的方法扎組織和血管,參與縫合器官和皮膚。
4、止血
大量出血導(dǎo)致胸、腹部積血使剖檢視野模糊不清,可能會(huì)影響和干擾病變的辨別和取材,因此動(dòng)物剖檢有時(shí)要求止血。
(1) 紗布?jí)K壓迫止血法。剖檢過(guò)程中,為觀察病變性質(zhì)和部位,辨清組織和神、血管通路,以及對(duì)較廣泛的毛細(xì)血管滲出,可用紗布按壓施行短暫性的止血,但不可用紗布來(lái)回擦拭血液,以免損傷組織。
(2) 鉗夾止血法。先用紗布?jí)K止血,看清出血點(diǎn)或血管后用止血鉗的垂直對(duì)準(zhǔn)出血點(diǎn),迅速而準(zhǔn)確的鉗夾并捻轉(zhuǎn),使血管閉塞而止血。
(3) 結(jié)扎止血法。用于動(dòng)脈出血或較大的血管出血。
三、剖檢取材程序
(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體的固定,通常為仰臥位固定。
(二)剖檢順序多為先腹腔后胸腔,再腦、脊髓、骨髓、皮膚肌肉等。取材順序基本與此相同。
(三) 檢查內(nèi)容
1、位置
有無(wú)移位、異位
2、大小
體積增大、縮小或腫大
3、色澤
整體或局部顏色的增減改變。
4、附加物
有無(wú)出血、積液、粘連。
5、質(zhì)地
硬、韌、軟等。
6、切面
多汁、泡沫狀、帶血、膿汁、干燥等。
7 、中空器官的黏膜面
有無(wú)出血、潰瘍、增厚、隆起物等。
(四)剖檢和取材程度
1、腹腔和腹腔器官
沿腹部正中線切開劍突至肛門之間的腹前壁,再沿zui低位肋骨分別向左右兩側(cè)切開側(cè)腹壁至脊柱兩旁,*暴露腹腔器官。觀察有無(wú)積液、血液和炎性滲出物,如有則用吸管吸出,測(cè)量容積并經(jīng)離心沉淀涂片檢查,必要時(shí)作細(xì)菌培養(yǎng)。檢查粘膜是否光滑,有無(wú)充血、瘀血、出血、破裂、膿腫、粘連、腫瘤、寄生蟲等,膈的緊張度及有無(wú)破裂。
(1)脾臟。檢查大小、厚薄、硬度、性狀、色澤、有否肥厚、破裂等。然后沿長(zhǎng)軸將脾切成兩半,切面要平整,檢查脾小梁、紅髓、濾泡的色澤,切面的出血量。
(2) 胰腺。檢查胰腺色澤和硬度,切面檢查有無(wú)出血。
(3)胃腸。檢查胃的大小、胃腸道漿膜面的色澤,有無(wú)粘連、腫瘤、寄生蟲結(jié)節(jié)。然后沿胃大彎、腸系膜附著部依次剪開胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸。觀察胃內(nèi)有無(wú)異物,內(nèi)容物的氣味及性狀,除去內(nèi)容物,檢查黏膜顏色,有無(wú)充血、出血、化膿。采用邊剪開邊觀察的辦法檢查腸管,觀察腸內(nèi)容物數(shù)量、性狀,有無(wú)氣體、血液、異物、寄生蟲,腸黏膜皺壁有無(wú)增厚、水腫、充血、粘液量、潰瘍、壞死、淋巴組織性狀及有無(wú)炎癥。
(4) 腎臟。首先檢查腎臟大小、硬度、被膜是否容易剝離,腎表面的色澤、平滑度,有無(wú)疤痕、出血變化。然后檢查切面皮質(zhì)和髓質(zhì)的色澤,有無(wú)瘀血、出血、化膿和梗死。注意觀察皮質(zhì)和髓質(zhì)交界處的切面是否隆突,以及腎盂、輸尿管、腎淋巴結(jié)的性狀,有無(wú)腫瘤及寄生蟲等。
(5) 肝臟。首先檢查肝臟的大小、被膜的性狀、邊緣的厚薄、實(shí)質(zhì)的硬度和色澤,以及肝淋巴結(jié)、血管、肝管等的性狀。然后作切面,檢查切面的出血量、色澤,肝小葉性狀、有無(wú)膿腫、肝壞死等變化。
(6) 腎上腺。觀察外形、大小、色澤和硬度,作縱切和橫切,檢查皮質(zhì)和髓質(zhì)的色澤及有無(wú)出血。
2、盆腔器官
(1) 膀胱。檢查膀胱的大小、尿量及色澤,黏膜有無(wú)出血、炎癥和結(jié)石等。
(2) 雄性生殖器官。檢查睪丸、附睪、凝固腺、前列腺有無(wú)粘連、出血、水腫、積液等。
(3) 雌性生殖器官。沿子宮體背側(cè)剪開子宮角,檢查子宮內(nèi)膜的色澤、有無(wú)充血、出血、炎癥等,觀察卵巢和輸卵管有無(wú)粘連、出血、水腫、積液等。
3、胸腔、口腔及其器官
用鑷子夾住胸骨劍突,剪斷膈肌與胸骨的連結(jié),提起胸骨,在胸椎兩側(cè)分別剪斷左、右側(cè)胸壁的肋骨,取下整個(gè)胸壁,打開胸腔,依次取出胸腺和心臟。將下頜骨的兩下頜支內(nèi)側(cè)與舌連結(jié)的肌肉切斷,將咽、喉、氣管、食道與周圍組織分離,用鑷子夾住氣管向上提起,剪斷肺與胸膜的連結(jié)韌帶,然后將咽、喉、氣管、食道連同整個(gè)肺臟一并取出。如有積液應(yīng)觀察其數(shù)量和性狀,盡量吸取,測(cè)量容積并涂片,檢查胸膜色澤,有無(wú)出血、充血或粘連。
(1) 心臟。剪開心包膜,暴露心臟,注意心包的光澤度及心包內(nèi)液體的情況,心臟的大小、外形、心外膜情況。自下腔靜脈入口處至右心房作直線剖開,從此直線中點(diǎn)沿心臟右緣剖至心尖部,從距離心尖部與心室間隔右側(cè)1cm處平行地剖至肺動(dòng)脈;檢查右心房、右心室、三尖瓣、肺動(dòng)脈瓣、腱索有否病變。自左右靜脈入口處將左心房直線切開,沿心臟左緣剖至心尖部,再?gòu)木嚯x心尖部與心室間隔左側(cè)1cm處平行地剖開左心室的前壁和主動(dòng)脈,檢查二尖瓣、主動(dòng)脈瓣、腱索有無(wú)病變,左心房、左心室內(nèi)壁有無(wú)出血和感染。自冠狀動(dòng)脈口起剪開前降支和旋支,在主動(dòng)脈根部右側(cè),于右心室的心外膜找到右冠狀動(dòng)脈主干,先橫切一刀,再剪至后降支;觀察有無(wú)粥樣硬化和血栓等。
(2) 口腔。檢查牙齒的變化,口腔黏膜的色澤、有無(wú)外傷、潰瘍和白斑,舌黏膜有無(wú)出血、外傷及舌苔的情況。
(3) 咽喉。觀察喉頭、會(huì)厭軟骨黏膜的色澤、淋巴結(jié)的性狀及喉囊有無(wú)積膿。
(4) 鼻腔。檢查鼻腔和鼻中隔黏膜的色澤、有無(wú)出血、炎性水腫、結(jié)節(jié)、糜爛、潰瘍穿孔及疤痕等。
(5) 下頜及頸部淋巴結(jié)。檢查下頜及頸部淋巴結(jié)的大小、硬度、有無(wú)出血和化膿等。
(6) 氣管。檢查氣管有無(wú)出血、黏液量等。
(7) 肺臟。檢查肺的色澤、有無(wú)出血、炎癥、肺氣腫、肺萎縮、腫瘤等。
(8) 其他器官。胸腺,甲狀腺,扁桃體等的色澤、有無(wú)粘連、出血、水腫等。
4、顱腔及腦
以猴為例,剝離顱頂部軟組織,沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm處的連線,用弓形鋸環(huán)繞該線鋸開顱骨外板及板障,然后用丁字鑿輕輕鑿開內(nèi)板,揭開顱蓋,此時(shí)可見覆蓋于腦表面的硬腦膜,切開硬腦膜暴露腦組織,在距顱骨鋸口斷端上0.5cm處,從前向后環(huán)行剪開硬腦膜,枕部的硬腦膜應(yīng)保留1.5cm長(zhǎng),防止取腦過(guò)程向后推壓腦組織時(shí),枕骨斷端損壞枕葉腦組織。向后方輕輕揭起硬腦膜及大腦鐮,暴露腦組織,用手指從額骨前上方伸入顱前窩,輕輕推壓大腦額葉,直至見到篩板上的嗅球?yàn)橹梗袛嘈峤z與嗅球的,將嗅球與腦一齊拉起,見到視神經(jīng)和視交叉時(shí)立刻停止,在腦底附近依次切斷頸內(nèi)動(dòng)脈、視神經(jīng),再將腦向后拉,可見到垂體及漏斗,繼續(xù)將腦向后拉起,切斷連于腦的腦神經(jīng)。從腦干腹側(cè)面把手術(shù)刀伸入枕骨大孔,切斷脊髓,即可將腦取出,用流水沖洗干凈備用。新鮮腦很軟,易變形和受挫傷,操作過(guò)程中必須用手扶托,取出腦后應(yīng)立刻用紗布包裹,浸泡固定液中保存,以免變形。
檢查軟腦膜、硬腦膜血管充盈情況,腦回之間的腦溝中液體的數(shù)量與色澤,腦表面凸起或凹下的地方是否明顯,可用手觸膜判定其硬度。用刀將腦做一水平切面,保留胼胝體,暴露側(cè)腦室,注意檢查尾狀核有無(wú)出血、軟化灶。側(cè)腦室內(nèi)容物數(shù)量、性質(zhì),然后將腦做多處切面,檢查有無(wú)變化。
四、臟器測(cè)量和稱重
(1) 解剖后應(yīng)迅速將臟器稱重,以免水分蒸發(fā)造成差異,特別是腎上腺等小器官的稱重。
(2) 臟器稱重前應(yīng)盡量將周圍脂肪組織和結(jié)締組織剔除,并用濾紙吸去臟器表面血液及體液,特別是腎上腺、甲狀腺、前列腺等較小的器官,更要新鮮稱重,防止器官干燥失水而重量減輕。
(3) 空腔器官稱重前,應(yīng)清除其腔內(nèi)液體,如心臟應(yīng)除去。