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上海士鋒生物科技有限公司

ELISA試劑盒,進(jìn)口,中檢所標(biāo)準(zhǔn)品,生物試劑,培養(yǎng)基,中間體

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資料下載

小鼠免疫球蛋白E(IgE)(ELISA)試劑盒說(shuō)明書(shū)

最近更新時(shí)間:2012-11-9

提 供 商:上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>18.8KB

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詳細(xì)介紹:
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小鼠免疫球蛋白EIgE)酶聯(lián)免疫分析(ELISA

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱(chēng):
通用名:小鼠免疫球蛋白EIgE)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿、或其它組織液中免疫球蛋白EIgE)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠免疫球蛋白EIgE)水平。用純化的IgE
體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入小鼠免疫球蛋白EIgE),再
HRP 標(biāo)記的羊抗小鼠抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底
TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白E 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD
值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠免疫球蛋白EIgE)濃度。
試劑盒組成
1 25
倍濃縮洗滌液30ml×1 7 終止液6ml×1
2
酶標(biāo)試劑6ml×1 8 標(biāo)準(zhǔn)品(540 μg/ml 0.5ml×1
3
酶標(biāo)包被板12 ×8 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1
4
樣品稀釋液6ml×1 10 說(shuō)明書(shū)1
5
顯色劑A 6ml×1 11 封板膜2
6
顯色劑B 6ml×1/12 密封袋1 個(gè)
標(biāo)本要求
1
.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2
.待檢血清1200 稀釋?zhuān)壕唧w為在試管中先按120 稀釋待檢血清(190μl 樣品稀釋
液中加10μl 待檢血清,混勻),再按110 稀釋待檢血清(取10μl120 稀釋的
待檢血清加90μl 的樣品稀釋液,混勻即可)
3
.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
4
.可將標(biāo)本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作步驟
1.
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為(360 μg/ml240μg/ml ,120μg/ml60μg/ml, 30μg/ml)。
2.
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣
品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混
勻。
3.
溫育:用封板膜封板后置37溫育30 分鐘。
4.
配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5.
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.
溫育:操作同3
8.
洗滌:操作同5。
9.
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色
15
分鐘.
10.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.
測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1
.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2
.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3
.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4
請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×1000)。
5
嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
6
.底物請(qǐng)避光保存。
7
.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8
.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9
.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10.
如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
檢測(cè)范圍:
20μg/ml-400μg/ml
規(guī)格:
96
人份/
保存條件及有效期
1
.試劑盒保存:;2-8。
2
.有效期:6 個(gè)月

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