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士鋒生物免疫酶測定法（ELISA）介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：999 發(fā)布時(shí)間：2014-1-2
（一）elisa實(shí)驗(yàn)原理及類型
將已知抗體或抗原結(jié)合在某種固相載體上，并保持其免疫活性。測定時(shí)將待檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體或酶標(biāo)抗原按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，用洗滌的方法分離抗原抗體復(fù)合物和游離物成分，然后加入底物顯色，進(jìn)行定性或定量測定。
ELISA可用于檢測抗體，也可用于檢測抗原。根據(jù)檢測目的和操作步驟的不同，通常有三種類型的檢測方法。
1．間接法 此法是檢測抗體zui常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測血清(抗體)與之結(jié)合，洗滌后，加酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測定。其原理見圖12－1。
圖12—1 ELISA間接法示意圖
2．雙抗體夾心法 此法常用于檢測抗原。將已知抗體吸附于固相載體，加入待測標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合，溫育后洗滌，加入酶標(biāo)抗體及底物溶液進(jìn)行測定。見圖12－2。
圖12—2 雙抗體夾心法檢測抗原
3．競爭法 此法可用于抗原及半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體上，加入待測抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原，使二者競爭地與固相抗體結(jié)合，經(jīng)過洗滌分離，zui后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測抗原含量呈負(fù)相關(guān)。見圖12－3。
免疫酶測定法(ELISA)
圖12－3競爭法測抗原示意圖