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士鋒生物吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測
點(diǎn)擊次數(shù)：767 發(fā)布時間：2013-11-21
一、基本原理
吞噬細(xì)胞具有對異物（細(xì)菌、綿羊紅細(xì)胞、雞紅細(xì)胞等）吞噬和消化的功能，在機(jī)體固有免疫中發(fā)揮重要作用。 小鼠腹腔內(nèi)注射硫代乙醇酸鈉，可刺激巨噬細(xì)胞的聚集。四日后小鼠腹腔內(nèi)注入羊紅細(xì)胞懸液，一小時后解剖收集腹腔吞嗜細(xì)胞，染色、鏡檢可觀察對羊紅細(xì)胞的吞嗜現(xiàn)象。通過計(jì)算吞嗜百分比或吞噬指數(shù)可測定吞噬細(xì)胞的吞嗜功能。
二、材料
1. ICR品系小鼠
2. pbs緩沖液
3. 3％硫代乙醇酸鈉
4.羊紅細(xì)胞（1％懸液，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心提供）
5. 解剖器材、注射器、尖吸管、橡皮吸頭、小試管及載玻片、
6. 瑞氏染液、甲醇
三、實(shí)驗(yàn)方法
1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：用無菌注射器吸取3％硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內(nèi)。
2. 四日后，注射羊紅細(xì)胞（1％懸液）1ml于小鼠腹腔內(nèi)。
3. 注射1小時后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml預(yù)溫的PBS，同時用手反復(fù)揉搓腹腔約1—2分鐘，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細(xì)胞。
4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內(nèi)。
5. 用尖吸管將腹腔液吹打均勻（盡量避免產(chǎn)生氣泡），吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。
6. 觀察結(jié)果，也可以將腹腔液涂片，平放于濕盤內(nèi)，37℃，孵育30分鐘。取出涂片，用預(yù)溫的PBS沖洗3次，然后用甲醇固定1分鐘，以瑞氏染液1份加pH6.4的PBS 2份混勻后，滴于涂片上染色5-10分鐘，以蒸餾水沖洗（切勿先將染液傾去）后，待干，鏡檢。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
觀察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞對羊紅細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，計(jì)算吞噬百分比，即每100個吞噬細(xì)胞中吞噬有羊紅細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)。也可用吞噬指數(shù)表示，即將100個吞噬細(xì)胞中所吞噬羊紅細(xì)胞的總數(shù)除以100。吞噬百分比和吞噬指數(shù)一般是平行的。
五、注意事項(xiàng)
（1） 充分揉搓腹腔，盡可能將吞噬細(xì)胞沖洗下來。
（2） 用尖吸管吸取腹腔液時，盡量避開腹腔臟器，避免損傷血管引起出血，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（3） 用瑞氏染液染色時，切勿先將染液傾去后再沖洗，以免染液中細(xì)小顆粒附著于玻片上影響標(biāo)本的清晰度