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技術(shù)文章
上海士鋒生物大腸桿菌感受態(tài)的制備過程
點擊次數(shù)：857 發(fā)布時間：2013-10-11
（1）接種單菌落于2ml LB培養(yǎng)液中， 37℃過。
（2）取0.25ml過菌入25ml LB培養(yǎng)液中，37℃振搖4～6h至A590=0.4～0.6。
（3）倒入50ml管內(nèi)，水浴10min，以2500～3000rpm離心5min，棄上清。
（4）緩慢加入75mmol/L預(yù)冷CaCl25ml懸浮菌體，冰浴20min，同上離心棄上清。
（5）緩慢加入75mmol/L預(yù)冷CaCl21.0ml輕輕混勻后分裝在1.5ml eppendorf管中，每管200μl，冰浴1～2h。
2.重組DNA的轉(zhuǎn)化
（1）將3只Eppendorf管按下列轉(zhuǎn)化項目作好標記：
（2）冰浴30min至1h。中間搖動3次，以防受體菌沉底。
（3）42℃90s。
（4）37℃水浴5min。
（5）加入無相應(yīng)抗生素的Lb 200μl，混勻后，37℃水浴30～60min。
（6）分別取3組反應(yīng)物各50μl在含相應(yīng)抗生素的固體lb培養(yǎng)基平皿上涂布，室溫下干燥，然后倒置于37℃溫箱中培養(yǎng)過。