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士鋒生物雙向電泳溶液配制大全
點(diǎn)擊次數(shù)：930 發(fā)布時(shí)間：2013-9-4
A. 裂解液 （lysis solution） （8M Urea, 4%CHAPS, 2% Pharmalyte3-10, 40 ml）
Final concentrationAmountUrea（Fw 60.06）8M19.2gCHAPS4%（w/v）1.6gPharmalyte3-102%800μlDouble distilled H2OTo 40ml
新鮮配制或者分裝貯存于-20℃ ① 如果需要，尿素的濃度可以調(diào)高到 9或者 9.8M，也可用 7M Urea，2M Thoiurea。 ②其他的去垢劑（如 Triton X-100，NP-40，還有其它的非離子去垢劑或者雙性離子去垢劑）可以取代 CHAPS。 ③如果需要，蛋白質(zhì)酶的抑制劑和或者還原劑可以加入。
B.水化液 （不含有 IPG buffer, Rehydration stock solution without IPG buffer） （8M Urea, 2% CHAPS, bromophenol blue,25ml）
Final concentrationAmountUrea （FW 60.06）12g12gCHAPS2%（w/v）0.5gBromophenol blue0.002%（w/v）50μlDouble distilled H2OTo 25ml
分裝貯存于-20℃ ①DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果膠內(nèi)上樣，則樣品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。 ②如果需要，尿素的濃度可以調(diào)高到 9或者 9.8M。 ③其他的去垢劑（如 Triton X-100，NP-40，還有其它的非離子去垢劑23或者雙性離子去垢劑）可以取代 CHAPS。
Final concentrationAmount溴酚藍(lán)儲(chǔ)液Bromophenol blue1%100mgTris-base50mM60mgDouble distilled H2OTo 10ml
C. 水化液 （含有 IPG buffer，Rehydration stock solution with IPG buffer） （8M Urea，2% CHAPS，0.5% or 2% IPG buffer，bromophenol blue，25ml）
Final concentrationAmountUrea （FW 60.06）8M12gCHAPS2%（w/v）0.5gIPG buffer（same pH range as the IPG strip）0.5%or 2%（v/v）125 or 500μltd>Bromophenol blue0.002%（w/v）50μl 1% solutionDouble distilled H2OTo 25ml
分裝貯存于-20℃ ①DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果膠內(nèi)上樣，則樣品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。 ②IPG buffer 的濃度取決于所用的等電聚焦系統(tǒng)和 IPG膠條的 pH 范圍。 ③如果需要，尿素的濃度可以調(diào)高到 9或者 9.8M。 ④其他的去垢劑（如 Triton X-100，NP-40，還有其它的非離子去垢劑或者雙性離子去垢劑）可以取代 CHAPS。 ⑤濃度為 0.5%的 IPG buffer用 125μl IPG buffer，濃度為 2%則用 500μl。
D.平衡液（SDS equlibration buffer）（50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml）
Final concentrationAmount1.5M Tris-cl,pH8.8（see solution F）50mM50mM 6.7mlUrea（Fw 60.06）6M72.07gGlycerol（87% v/v）30%（v/v）69mlSDS（Fw 288.38）2%（w/v）4.0gBromophenol blue0.002%（w/v）400μl 1% solutionDouble distilled H2OTo 200ml
分裝 40ml 貯存于-20℃。這是一個(gè)貯存液。用之前在加 DTT或者碘乙酰胺。
E.單體貯存液（Monomer stock solution） （30% acrylamide,0.8% N,N!-methylenebisacrylamide,200ml）
Final concentrationAmountAcrylamide（Fw 71.08）30%60.0gN,N`-methylenebisacrylamide（Fw 154.17）0.8%1.6gDouble distilled H2OTo 200ml
用 0.45微米的濾紙過(guò)濾。4℃避光保存。
F.4x分離膠溶液（4x Resolving gel buffer）（1.5M Tris-Cl pH8.8, 1000 ml）
Final concentrationAmountTris-base（Fw 121.1）1.5M181.5gDouble distilled H2O750mlHCl（Fw 36.46）Adjust to pH8.8Double distilled H2OTo 1000ml
用 0.45微米的濾紙過(guò)濾，4℃保存。
G.10% SDS溶液
Final concentrationAmountSDS（Fw 288.38）10%（v/v）5.0gDouble distilled H2OTo 50 ml
用 0.45微米的濾紙過(guò)濾，室溫保存。
H.10%過(guò)硫酸銨（10% Ammonium persulphate）
Final concentrationAmountAmmonium persulphate（Fw 228.20）10%0.1gDouble distilled H2OTo 1ml
當(dāng)加入水時(shí)，新鮮的過(guò)硫酸銨會(huì)發(fā)出“咔嚓”聲音。如果沒(méi)有聲音，則需要換新的藥品。用之前配制。