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士鋒生物WEALTEC垂直電泳儀的使用方法
點擊次數(shù)：938 發(fā)布時間：2013-8-29
本實驗的目的是學(xué)習(xí)WEALTEC垂直電泳儀基本操作流程，確保垂直電泳儀正常運行。主要內(nèi)容如下：灌膠、染色與脫色注意事項，詳細方法如下：
一、 灌膠
1. 把制膠器放在平穩(wěn)的臺面上。
2. 保持制膠器干燥，抬起兩側(cè)的羽狀開關(guān)放開卡門，平放，放進橡膠墊圈并緊扣。先把厚玻璃平板放入，再放兩側(cè)的墊片，后放入帶凹型的玻璃平板。
3. 緊緊合上卡門，同時按壓兩側(cè)的羽狀開關(guān)聽到“咔嚓”聲音。
4. 倒分離膠：將配好的分離膠溶液用加樣槍緩慢加入制膠玻板之間,直至液面達到卡門邊框下緣線處。小心用加樣槍將去離子水沿水平方向加入制膠板中的分離膠液面上，以防止膠液蒸發(fā)并保證膠面平整。聚合大約需要30mins。
5. 倒?jié)饪s膠：分離膠聚合后，倒掉去離子水，用濾紙吸去殘液。在玻板中加滿濃縮膠溶液，輕輕地插入合適的梳子，梳子的厚面向?qū)嶒炚?，避免產(chǎn)生氣泡。
30分鐘后，除去梳子，抬起兩側(cè)的羽狀開關(guān)放開卡門，拿出帶膠的制膠玻板。
6. 安裝電泳槽：按壓電泳槽中央夾具的開關(guān)使卡門松開，將玻璃夾板放入槽內(nèi)。注意，兩玻璃夾板的凹玻板均應(yīng)與電泳槽內(nèi)芯接觸。如果每次只電泳一塊膠，另一套玻璃夾板必須用提供的有機玻璃板代替。
7. 樣品處理：在等待濃縮膠聚合時，可對樣品進行處理，在樣品中按1:1體積比加入上樣buffer，在100℃加熱3-5分鐘以使蛋白質(zhì)變性。
8. 加樣：在外水槽加電泳緩沖液至槽體的一半位置。放正槽體，繼續(xù)加注緩沖液，避免產(chǎn)生氣泡，使內(nèi)槽的水位均超過凹形板的缺口但低于方形板的上沿。用微量加樣器或普通加樣槍在梳井內(nèi)按預(yù)定順序加樣，加樣量通常為10～25μl。
9. 電泳：蓋好上蓋，在100—150V的電壓下電1—2小時，一般濃縮膠電壓80V20~30Min，分離膠120V80Min，到樣品指示劑到達玻璃板的下緣，關(guān)掉電源。取下玻璃夾板。用刀片或薄板將膠板玻璃橇開，用單面剃刀片將分離膠切掉，將凝膠板的左上角切掉一小角以標(biāo)記樣品順序。