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實(shí)驗(yàn)技巧:流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期結(jié)果分析
點(diǎn)擊次數(shù):3321 發(fā)布時(shí)間:2013-7-24
*張是未轉(zhuǎn)染的第12代,第二章是轉(zhuǎn)染后的第22代。
*張圖:增值率S(合成期)+G2/M(合成后期/分裂期):21.7%
第二張圖:增值率S(合成期)+G2/M(合成后期/分裂期):19.6%
據(jù)此分析兩者的增值沒(méi)有明顯的差別。雖然第二張圖比*張圖的S期有所增高,但G2期下降了。
細(xì)胞周期是基于細(xì)胞處于不同分裂時(shí)期具有不同的DNA含量而分析細(xì)胞處于不同的時(shí)期的方法。確切的說(shuō)結(jié)果中G1期的百分比實(shí)際上是G1+G0期細(xì)胞的百分比。 G2的百分比實(shí)際上是G2+M期細(xì)胞的百分比。
圖上zui高的峰代表了G1期(也稱(chēng)2倍體峰),后面的代表G2期、S期(也稱(chēng)4倍體峰)。
1、細(xì)胞周期的概念
細(xì)胞由一次分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束,都要經(jīng)歷相同的變化階段(即G1→S→G2→M )周而復(fù)始地進(jìn)行活動(dòng),細(xì)胞的這種生長(zhǎng)、分裂循環(huán)即稱(chēng)為細(xì)胞周期(cell cyc1e)。一個(gè)細(xì)胞周期包括有絲分裂期(M)和分裂間期(G1、S、G2)。盡管在各種細(xì)胞中各期所占時(shí)間都不盡相同,但相對(duì)而言M期zui短,S期卻較長(zhǎng)。
2、分裂間期
(1)G1期
前一次有絲分裂完成到S期開(kāi)始。各種與DNA復(fù)制有關(guān)的酶明顯增多,線粒體、葉綠體、核糖體增多,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在更新擴(kuò)大,高爾基體、溶酶體都增加,中心粒彼此分離、復(fù)制。
(2)S期
DNA、組蛋白合成
(3)G2期
S期結(jié)束后到有絲分裂開(kāi)始。由上可以看出G2期、S期、M期反映了細(xì)胞的增殖活性,特別是G2期、S期(因M期較短)。因而,G2/M%+S%反映了細(xì)胞增殖能力。二者有無(wú)差別要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。
3、細(xì)胞周期阻滯
對(duì)于生殖細(xì)胞及保持增殖能力的細(xì)胞(如干細(xì)胞),由于細(xì)胞不斷的增殖, 細(xì)胞總是處于從G1 、S、G2 和M 期的連續(xù)的細(xì)胞周期中。 在細(xì)胞周期的各階段, 細(xì)胞分別進(jìn)行著DNA 復(fù)制、蛋白質(zhì)合成及細(xì)胞分裂等重要的生理活動(dòng)。每一階段都是下一階段的準(zhǔn)備期, 真核細(xì)胞可以在啟動(dòng)下一個(gè)周期前監(jiān)測(cè)與一個(gè)細(xì)胞周期順利完成相關(guān)的生化事件,這包括各種體內(nèi)外因素威脅下游事件進(jìn)行時(shí)可逆地將細(xì)胞周期阻滯在特定的生理階段的能力,而這種特定的生理階段稱(chēng)為檢定點(diǎn)(checkpoint) 。只有前一階段的生理活動(dòng)完成后,才能通過(guò)稱(chēng)為檢定點(diǎn)的階段,進(jìn)入周期的下一步,一些突發(fā)事件引發(fā)的細(xì)胞反應(yīng)能影響驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期前進(jìn)的因子,從而使細(xì)胞周期停滯在檢定點(diǎn), 這被稱(chēng)為細(xì)胞周期阻滯(cell cycle arrest)。
比較相應(yīng)的細(xì)胞G1 、S、G2 期差異有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,才能說(shuō)有無(wú)細(xì)胞周期阻滯。