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技術(shù)講解：細(xì)胞融合的方法及誘導(dǎo)物
點(diǎn)擊次數(shù)：1732 發(fā)布時(shí)間：2013-4-11
同種細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)2個(gè)靠在一起的細(xì)胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合;異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合，稱誘發(fā)融合。
仙臺病毒法融合
①兩種細(xì)胞在一起培養(yǎng)，加入病毒，在4℃條件下病毒附著在細(xì)胞
膜上。并使兩細(xì)胞相互凝聚;
②在37℃中，病毒與細(xì)胞膜發(fā)生反應(yīng)，細(xì)胞膜受到破環(huán)，此時(shí)需
要Ca2+和Mg2+，zui適PH為8.0一8.2;
②細(xì)胞膜連接部穿通，周邊連接部修復(fù)，此時(shí)需Ca2+和ATP;
④融合成巨大細(xì)胞，仍需ATP 。
聚乙二醇（PEG）法
聚乙二醇（PEG）結(jié)構(gòu)為：HOH2C（CH20CH2）nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作細(xì)胞融合劑。PEG經(jīng)高壓滅菌后，與溫?zé)岬腅ngle氏液混合。通常用分子量低于1000的PEG作融合劑，50%PEG溶液能產(chǎn)生zui多雜交細(xì)胞。PEG溶液在pH6.0時(shí)細(xì)胞融合率zui高。
電融合法
在直流電脈沖的誘導(dǎo)下，細(xì)胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細(xì)胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進(jìn)而質(zhì)膜開始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。
優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復(fù)性強(qiáng)、對細(xì)胞傷害小;
裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程;
免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程、誘導(dǎo)過程可控性強(qiáng)。
融合誘導(dǎo)物
細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺病毒（Sendai virus），化學(xué)法如用聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和物理法如電脈沖。目前應(yīng)用zui廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎谩⒑啽?，且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機(jī)制尚不*清楚，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。動植物細(xì)胞融合方法不同，生物法利用滅活仙臺病毒是動物細(xì)胞融合所*的。
自發(fā)條件下或人工誘導(dǎo)下, 兩個(gè)不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè)雜種細(xì)胞?；具^程包括細(xì)胞融合導(dǎo)致異核體（heterokaryon）的形成, 異核體通過細(xì)胞有絲分裂導(dǎo)致核的融合, 形成單核的雜種細(xì)胞。有性生殖時(shí)發(fā)生正常的細(xì)胞融合, 即由兩個(gè)配子融合成一個(gè)合子。
細(xì)胞融合不僅可用于基礎(chǔ)研究，而且還有重要的應(yīng)用價(jià)值，在植物育種方面已經(jīng)成功的有蘿卜+甘藍(lán)、粉藍(lán)煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。細(xì)胞融合另一個(gè)重要應(yīng)用就是制備單克隆抗體，單克隆抗體可以用作診斷試劑，治療疾病和運(yùn)載藥物，具有準(zhǔn)確，，簡易，快速等優(yōu)點(diǎn)。