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兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù)：1279 發(fā)布時(shí)間：2012-9-26
兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說(shuō)明書(shū) 本試劑盒僅供研究使用。 藥品名稱： 通用名：兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒 使用目的： 本試劑盒用于測(cè)定兔血清，血漿及相關(guān)液體樣本中脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）含量。 實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）水平。用純化的兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的Lp-PLA2待檢樣品，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中兔脂蛋白磷脂酶A2 （Lp-PLA2）濃度。 試劑盒組成 1 20倍濃縮洗滌液 50ml×1瓶 9 標(biāo)準(zhǔn)品S1（6μmol/L） 0.5ml×1瓶 2 鏈霉親和素-HRP 6ml×1瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S2（4μmol/L） 0.5ml×1瓶 3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 標(biāo)準(zhǔn)品S3（2μmol/L ） 0.5ml×1瓶 4 生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體 6ml×1瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S4（1μmol/L ） 0.5ml×1瓶 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S5（0.5μmol/L） 0.5ml×1瓶 6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1個(gè) 7 終止液 6ml×1瓶 11 封板膜 3張 8 樣品稀釋液 6ml×1瓶 12 說(shuō)明書(shū) 1份 標(biāo)本要求 1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。 2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于 操作步驟 1. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測(cè)樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻， 3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。 5. 加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。 6. 洗滌：操作同4。 7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻， 8. 洗滌：操作同4。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻， 10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 注意事項(xiàng) 1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4． 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。 7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。 線形范圍： 03μmol/L -8μmol/L 規(guī)格： 96人份/盒 保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2 2．有效期：6個(gè)月