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公司新品：β-Gal染色試劑盒使用說明說
點擊次數(shù)：2807 發(fā)布時間：2021-10-8
β-Gal染色試劑盒 (組織專用)?
貨號：R0757
規(guī)格：100T
保存：-20℃，避光，12 個月。
簡介：?β
β-Gal染色試劑盒(組織專用)?(β-Galactosidase?Staining?Kit)是一種基于衰老時SA-β-Gal?(senescence-associated?β-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。絕大多數(shù)正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老狀態(tài)。此時細胞仍然是存活的，但細胞的基因和蛋白的表達譜發(fā)生了很大改變。?
β-Gal染色試劑盒(組織專用)?以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產(chǎn)物，光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細胞，對衰老前的細胞(presenescent?cells)、靜止期細胞(quiescent?cells)、永生細胞(immortal?cells)或腫瘤細胞等不會染色。對于組織切片或組織塊應采用冰凍切片，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定，對于普通的切片按每片1ml可以檢測100個樣品
組成：
名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑(A):?β-Gal?Fixative | 100ml | 4℃ |
試劑(B):?X-Gal?Solution | 5ml | -20℃ |
試劑(C):?β-Gal Staining?A?Solution | 1ml | 4℃ |
試劑(D):?β-Gal Staining?B?Solution | 1ml | 4℃ |
試劑(E):?β-Gal Staining?C?Solution | 100ml | 4℃ |
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自備材料：?
1、PBS或HBSS??
2、2、冷凍切片?
3、3、顯微鏡??
操作步驟(僅供參考)：?
1. 對于組織切片或非常小的組織塊，加入適當體積的β-Gal Fixative，染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于10分鐘。對于小的組織塊，固定時間應該適當延長。
2. 用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時間還要適當延長。
3. 吸除PBS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制參照下圖。
4. 37℃孵育20分鐘至2小時，或更長時間，直至部分細胞的顏色變藍。如果孵育時間較長，可以用parafilm或保鮮膜封住放置組織的容器，以防止蒸發(fā)。
5. 吸除染色工作液，用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時間還要相應延長。
6. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。
方法參考下表比例：
名稱 | 體積 |
β-Gal Staining?A?Solution | 10ul |
β-Gal Staining?B?Solution | 10ul |
β-Gal Staining?C?Solution | 930ul |
X-Gal?Solution | 50ul |
說明：對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌；而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。?4、37℃孵育2h至過夜，直至樣品顯藍色?？梢杂?/span>parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)，最好把整個切片浸泡在染色工作液中，應注意37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行。?5、普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長時間。?
注意事項：?
1、?β-Gal?Fixative有一定的腐蝕性和氣味，操作時請注意防護。?
2、?β-Gal?染色反應依賴于特定的pH條件，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行染色反 應。用于細胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的pH值，而導致染色失敗。?
3、?配制染色工作液時需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯 (polystyrene)容器。但染色時可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。??
有效期：?12個月有效。? ?