Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價(jià),另常備 Trizol DMSO lipo2000 lipo3000 SC-2004 SC-2005常備現(xiàn)貨 ;貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。訂貨:
關(guān)鍵詞:Estigen
上海乾思生物Estigen品牌代理經(jīng)營(yíng)進(jìn)口胎牛血清、細(xì)胞因子、ELISA試劑盒、細(xì)胞、抗體、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗、其產(chǎn)品吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA實(shí)驗(yàn)等。完善的庫(kù)存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的純化技術(shù),保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
怎樣查到一個(gè)特定細(xì)胞株的相關(guān)知識(shí)和培養(yǎng)條件?
ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁(yè)的Cells and hybridomas鏈接,輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)。數(shù)據(jù)庫(kù)中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述,包括細(xì)胞的來(lái)源,培養(yǎng)和凍存條件,以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。
如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基?
培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEM或M199中同樣容易生長(zhǎng)??傊?,*MEM、DMEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng);RPMI1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng);各種目的無(wú)血清培養(yǎng)*AIMV培養(yǎng)基(SFM)。
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程:
1 收集樣品
2 相關(guān)試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預(yù)混試劑)。
3 實(shí)驗(yàn)儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機(jī)。
4 總RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機(jī)引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系。混勻后70℃變性RNA 5分鐘,冰上速冷1分鐘,離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系。PCR儀中反應(yīng)條件設(shè)置 37℃延伸60min,70℃保溫15min終止反應(yīng)。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;" />6 引物設(shè)計(jì)與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shí)時(shí)定量PCR 按以下反應(yīng)體系進(jìn)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul,下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀擴(kuò)增反應(yīng)條件設(shè)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(gè)循環(huán))。
8 PCR產(chǎn)物溶解曲線分析 將所擴(kuò)增的PCR 產(chǎn)物進(jìn)行溶解曲線分析,單峰溶解曲線表示擴(kuò)增產(chǎn)物單一,無(wú)非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。溶解曲線生成的反應(yīng)程序?yàn)? 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。
注意事項(xiàng):收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定,對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融,標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20℃可保存1個(gè)月,-70度可保存6個(gè)月,部分標(biāo)本需添加抑肽酶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?
?。?)細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
?。?)凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā);
?。?)存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā);
(4)凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
?。?)視具體情況而定。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
?。?)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
?。?)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
?。?)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
?。?)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
?。?)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
?。?)視具體情況而定。白介素受體相關(guān)激酶ELISA KIT
白三烯B4 ELISA KIT
白三烯C4 ELISA KIT
白三烯E4 ELISA KIT
白細(xì)胞分化抗原4 ELISA KIT
白細(xì)胞介素1受體拮抗劑ELISA KIT
白細(xì)胞抗原B27 ELISA KIT
白細(xì)胞內(nèi)皮粘附分子1(L-選擇素)CD62L ELISA KIT
白血病抑制因子ELISA KIT
白血病抑制因子受體ELISA KIT