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Streptavidin熒光標記(FITC/TRITC/CY3/CY5/thiol)簡述和應用
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鏈霉親和素(SA)簡述:
鏈霉親和素(SA)是Streptomyces avidinii菌的分泌物,其分子量及結(jié)合的能力與雞蛋清中的親和素相似,等電點6.0,非特異性結(jié)合遠比親和素低。
鏈霉親和素(SA)的來源:
SA 是Streptomyces avicllrdi菌培養(yǎng)過程中的分泌產(chǎn)物,主要通過2一亞氨基生物索親和層析法提純,1L培養(yǎng)液中含蛋白10~60mg。鏈霉親和素是四聚體蛋白,大小為66KDa。一分子鏈霉親和素可以度特異性地與四分子結(jié)合,兩者之間的親和力烈。
鏈霉親和素(SA)的應用:
enzyme immunoassays, 測定
immunohistochemistry, 組織化學
flow cytometry, 流式儀
Western blot, 原位雜交
immunoblotting procedures印跡程序
Western blot印跡
鏈霉親和素(SA)的熒光標記物及激發(fā)波長:
熒光染料 | 顏色 | Ex(nm) | Em(nm) |
FITC | 綠色 | 490 | 525 |
TRITC | 黃色 | 547 | 572 |
Cy3 | 黃色 | 555 | 570 |
Cy5 | 紅色 | 646 | 620 |
Cy7 | 深紅色 | 750 | 773 |
熒光標記的鏈霉親和素(SA)的介紹:
FITC-Streptavidin:
FITC是使用的熒光基團,但其大的缺點是淬滅快,使用抗淬滅劑可以減輕。
花青染料(Cy2,Cy3,Cy5,Cy7-Streptavidin):
Cy2比FITC穩(wěn)定,且在表面熒光顯微鏡下,Cy2的熒光FITC。Cy3和Cy5比大多數(shù)熒光基團亮,穩(wěn)定,背景弱。二者常在共聚焦顯微實驗中作多標記。但Cy5的缺點是不能用表面熒光顯微鏡觀察,因此通具有遠紅外檢測器的共聚焦顯微鏡觀察。
TRITC-Streptavidin:
TRITC,RRX,TR:TRITC經(jīng)常和FITC一起用于雙標記實驗中,也可以使用RRX或TR,但TR會產(chǎn)生較的背景。在使用裝有氪氫燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標記實驗時,RRX尤其有用,可以和Cy2(或FITC)及Cy5一起使用,因為RRX的發(fā)射波長在Cy2和Cy5中間,且和這兩者的重疊很少。
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