一種功能化交聯(lián)劑SMCC（64987-85-5）偶連蛋白和多肽

蛋白質(zhì)交聯(lián)劑是一類小分子化合物，具有2個(gè)或者多的針對(duì)基團(tuán)（-NH2、-COOH、-HS等）的反應(yīng)性末端，可以和2個(gè)或者多的分子分別偶聯(lián)，從而使這些分子結(jié)合在一起，終形成共軛蛋白。

產(chǎn)品名稱：SMCC

簡(jiǎn)介：SMCC crosslinker (Succinimidyl-4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) is a heterobi-functional protein crosslinker with a maleimide group that is sulfhydryl (thiol; -SH) reactive and a NHS ester group that is amine reactive. The SMCC crosslinking reagent is permeable across the lipid bilayer of the cell membrane. The 9 atom spacer arm of SMCC is not cleavable.

Molecular Weight: 334.3

CAS #: 64987-85-5

Spacer Length: 8.3 Å

Alternative Names: 4-(N-Maleimidomethyl)cyclohexanecarboxylic acid N-hydroxysuccinimide ester;

SMCC是一類含有N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活性酯和馬來(lái)酰亞胺的雙功能偶聯(lián)劑.可以將分別含有巰基和氨基的化合物鍵接在一起。該交聯(lián)試劑可滲透到膜的脂質(zhì)雙層中，NHS活性酯與伯胺在PH7-9的形成酰胺鍵。馬來(lái)酰胺與巰基在PH6.5-7.5的下形成穩(wěn)定的硫醚鍵。在水溶液中，NHS活性酯的水解是（與氨基的反應(yīng)）個(gè)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)。馬來(lái)酰胺比NHS穩(wěn)定，但是在PH大于7.5時(shí)，馬來(lái)酰胺會(huì)慢慢水解，失去與巰基反應(yīng)的特異性。因而，在使用SMCC時(shí)通常是在PH7.2-7.5的下進(jìn)行，并且先讓NHS發(fā)生反應(yīng)。SMCC結(jié)構(gòu)里的環(huán)己烷環(huán)可以降低馬來(lái)酰胺的水解速率。這使得蛋白質(zhì)在用SMCC修飾之后可以凍干存放一段時(shí)間。很多蛋白質(zhì)都選用該試劑來(lái)進(jìn)行馬來(lái)酰亞胺修飾。

KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin)，即血藍(lán)蛋白，是在某些軟體、節(jié)肢(蜘蛛和甲殼蟲)的血淋巴中發(fā)現(xiàn)的一種游離的藍(lán)色呼吸。血藍(lán)蛋白含兩個(gè)直接連接多肽鏈的銅離子，與含鐵的血紅蛋白類似，它易于氧結(jié)合，也易與氧解離，是已知的惟一可與氧可逆結(jié)合的銅蛋白，氧化時(shí)呈青綠色，還原時(shí)呈白色。其分子量45０ ０00～１30 000。由于KLH比BSA有的原性，因而是常被選用的載體蛋白。

用SMCC來(lái)制備抗體-或者半抗原作載體的蛋白質(zhì)，經(jīng)常采用兩步法。先，含有氨基的蛋白質(zhì)與幾倍的偶聯(lián)劑反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后通過脫鹽柱或者透析的方法除掉沒有反應(yīng)完的SMCC。然后，再與含有巰基的蛋白質(zhì)反應(yīng)。在實(shí)際操作中要注意的是，SMCC怕潮濕，存放時(shí)要和干燥劑一起存放。并且使用中從冰箱拿出來(lái)時(shí)要先在室外放置一段時(shí)間平衡溫度，以免立刻開啟，空氣中水分遇冷凝結(jié)，破壞SMCC 結(jié)構(gòu)。

• 將 20 mg SMCC（這是聯(lián)接40條多肽的量）溶于2 ml DMF。
• 將0.8 ml KLH加入到25 ml圓底燒瓶中，補(bǔ)加1×PBS(pH 7.2)使蛋白終濃度為 15 mg/ml。
• 將溶解好的SMCC溶液緩慢滴加到120 mg KLH 蛋白體系中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1h。
• 用1 L 1×PBS (PH 7.4) 溶液于4℃下透析 6 小時(shí)，除去游離的SMCC。
• 將透析后的KLH蛋白倒入50 ml離心管中，通過離心管的刻度確定其體積，根據(jù)反應(yīng)前加入的KLH蛋白的量來(lái)計(jì)算透析后蛋白的濃度，然后根據(jù)其濃度將2.5 mg KLH-SMCC溶液轉(zhuǎn)移到5 ml離心管中。
  例如：反應(yīng)前加入KLH蛋白的量為120 mg，透析后的KLH蛋白體積為20 ml，那么透析后的KLH蛋白濃                                                      μl KLH-SMCC溶液轉(zhuǎn)移到5 ml離心管中。
• 將 3.0 mg 多肽用 0.6 ml 1×PBS (pH 7.2) 溶液溶解。
  注意：這里多稱量出0.5 mg多肽是用來(lái)做ELISA檢測(cè)的，取出100 μl即可。檢測(cè)多肽隨交聯(lián)好的抗原一起寄出，濃度為5 mg/ml。
• 用Ellman試劑檢測(cè)多肽中的巰基：在96孔板中加入100 μl Ellman試劑儲(chǔ)備液，再加入10μl多肽溶液，用Nano分光光度計(jì)在λ=412 nm下測(cè)其紫外吸收值，如果OD值>0.15做 下一步；OD值<0.15并>0.05補(bǔ)加多肽，直要求；OD值<0.05返回多肽步驟重質(zhì)控。
  Ellman試劑是用來(lái)檢測(cè)游離巰基的，如果檢測(cè)液顯黃色說(shuō)明多肽的Cys的巰基大部分以游離態(tài)存在；如果檢測(cè)液不顯黃色則說(shuō)明多肽Cys中的巰基已經(jīng)被氧化形成二聚體或多聚體。
• 將多肽液滴加到KLH-SMCC管中，室溫下用垂直混勻器混勻反應(yīng)4小時(shí)。
• 用Ellman試劑檢測(cè)多肽中的巰基：在96孔板中加入100 μl Ellman試劑儲(chǔ)備液，再加入10 μl 教練后的多肽溶液，用Nano分光光度計(jì)在λ=412 nm下測(cè)定紫外吸收值。OD值<0.03說(shuō)明多肽和KLH蛋白交聯(lián)率已80%以上；OD值>0.03則再補(bǔ)加SMCC活化好的KLH蛋白繼續(xù)交聯(lián)。如果Ellman試劑顯黃色說(shuō)明多肽與KLH蛋白偶聯(lián)不；如果Ellman試劑不顯黃色則說(shuō)明多肽已經(jīng)全部與KLH蛋白偶聯(lián)。

【交聯(lián)劑的應(yīng)用】：

膜結(jié)構(gòu)研究

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究

蛋白質(zhì)間相互作用研究

生物研究（靶向）

載體蛋白與半抗原的連接

蛋白質(zhì)或其他分子的固相化

抗體的標(biāo)記、標(biāo)記轉(zhuǎn)移

蛋白質(zhì)與核酸的連接

蛋白質(zhì)修飾等 

【選擇交聯(lián)劑應(yīng)考慮的因素】：

反應(yīng)特異性

反應(yīng)指向性

間臂長(zhǎng)度性

水溶性

透膜性

一種或兩種反應(yīng)基團(tuán)

熱反應(yīng)還是光電反應(yīng)

可否切斷

可否碘標(biāo)

【可與交聯(lián)劑反應(yīng)的基團(tuán)】：

游離氨基（賴氨酸ε或N末端的氨基）

巰基（半胱氨酸）

羧基（天冬氨酸，谷氨酸，末端羧基）

羥基（或蘇氨酸）

酮基，醛基，糖鏈

苯酚衍生物（苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸）

放射性基團(tuán): R-N3 

西安瑞禧生物科技有限公司是一家經(jīng)營(yíng)科研試劑的公司，產(chǎn)品服務(wù)于納米靶向試劑、傳遞、點(diǎn)擊化學(xué)等領(lǐng)域。西安瑞禧生物科技有限公司可以提供一系列的蛋白交聯(lián)劑，包含有同端雙功能交聯(lián)劑，異端雙功能交聯(lián)劑，氘代交聯(lián)劑，交聯(lián)劑及其他交聯(lián)劑等等產(chǎn)品。我們提供的交聯(lián)劑產(chǎn)品小包裝是100毫克，，科研客戶。

產(chǎn)品列表：

Sulfo-NHS   CAS #: 106627-54-7

BS3 CAS #: 82436-77-9

BS2G

BSG CAS #: 79642-50-5

DSP CAS #: 57757-57-0

DSS CAS #: 68528-80-3

DTSSP CAS #: 81069-02-5

EGS CAS #: 70539-42-3

Sulfo-EGS

DSSeb CAS # 23024-29-5

BMPS CAS #: 55750-62-4

EMCS CAS #: 55750-63-5

GMBS CAS #: 80307-12-6

LC-SPDP

MBS CAS #: 58626-38-3

PDPH

SBA CAS #: 42014-51-7

SIA CAS #: 39028-27-8

SMCC CAS #: 64987-85-5

SMPB CAS #: 79886-55-8

SMPH

SPDP CAS #: 68181-17-9

Sulfo-LC-SPDP

Sulfo-MBS

Sulfo-SANPAH CAS #: 102568-43-4

Sulfo-SMCC CAS #: 92921-24-9

BS2G-d4

BS3-d4

DSG-d4

DSS-d4

DSP-d8

Biotin Hydrazide CAS #: 66640-86-6

NHS-Biotin CAS #: 35013-72-0

NHS-SS-Biotin CAS #: 142439-92-7

Sulfo-NHS-Biotin CAS #: 119616-92-5

Sulfo-NHS-LC-Biotin CAS #: 128062-22-0

Sulfo-NHS-SS-Biotin CAS #: 202057-28-1

HPG CAS #: 24645-80-5

SATA CAS #: 76931-93-6

Sulfo-NHS Acetate CAS #: 152305-87-8

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