穿膜肽CPPs系列產(chǎn)品-脂質(zhì)體/納米膠束載體

pH性多肽遞送的狀況

根據(jù)pH響應(yīng)機(jī)制、多肽及載體材料的不同,可以將pH性多肽遞送分為5型: pH響應(yīng)性穿膜肽介導(dǎo)的遞送; pH響應(yīng)性多肽自組裝釋放; pH依賴(lài)性電荷反轉(zhuǎn)傳遞; pH性寡肽介導(dǎo)的遞送; pH型載體材料與穿膜肽共修飾納米粒。

1.1 pH響應(yīng)性穿膜肽介導(dǎo)的遞送

穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs) 是一種由10～30個(gè)氨基酸殘基組成的陽(yáng)離子短肽。穿膜肽能介導(dǎo)多種物質(zhì)進(jìn)入,如DNA、蛋白質(zhì)、抗體、顯像劑、納米粒和脂質(zhì)體等[9]。將CPPs與傳統(tǒng)的抗 (如紫杉醇、喜樹(shù)堿和鬼臼等)共價(jià)連接后,能提這些的抗活性,同時(shí)也增了這些的水溶性、組織滲透力及在組織中的分布[10]。然而,由于穿膜肽的選擇性較差、正電荷多而引起的體內(nèi)、穩(wěn)定性差等問(wèn)題,使其在體內(nèi)的應(yīng)用受到了限制。因此,研究者想出了很多策略以提穿膜肽的靶向性[11],如將特異性靶向配體與穿膜肽結(jié)合[12],或制成靶向配體與穿膜肽共修飾納米粒[13]和脂質(zhì)體[14]。

1.1.1 pH響應(yīng)性穿膜肽

抗分子很難通過(guò)膜脂質(zhì)雙分子層進(jìn)入到內(nèi),CPPs能克服此缺點(diǎn),攜帶物質(zhì)直接進(jìn)入到內(nèi)而不滯留于溶體中[15]。但是,由于CPPs缺乏特異性使其應(yīng)用受到了限制,人們?cè)噲D尋找到某些適宜的靶向策略,即在CPPs到達(dá)組織之前設(shè)法屏蔽其結(jié)構(gòu)域,當(dāng)CPPs到達(dá)組織后去屏蔽,從而規(guī)避非特異性攝取,以提CPPs在方面的應(yīng)用。

Transportan是由神經(jīng)甘丙肽的12個(gè)功能性氨基酸和黃蜂通過(guò)賴(lài)氨酸連接而成的穿膜肽,它通過(guò)能量非依賴(lài)通路穿過(guò)膜,能Na+、K+-ATPase,導(dǎo)致溶體裂解,增加了的生物利用度[16]。但Transportan的選擇性差,Soomets等[17]設(shè)計(jì)了一系列Transportan的類(lèi)似物 (TP7～TP15)。其中,TP10具有的膜轉(zhuǎn)位能力,它是由21個(gè)氨基酸殘基組成的穿膜肽,能將多種物質(zhì)運(yùn)送內(nèi),如寡核苷酸、核酸肽、蛋白質(zhì)及其他多肽類(lèi)物質(zhì)[18]。

本課題組前期研究中,對(duì)TP10進(jìn)行了一系列的修飾改造,結(jié)果發(fā)現(xiàn)TP10-5(TK) 是TP10類(lèi)似物中有的一個(gè)[19]。因?yàn)楸砻嫠鶐У呢?fù)電荷多于正常,所以TP10和TK通過(guò)靜電引力會(huì)優(yōu)先與結(jié)合,隨之進(jìn)入內(nèi)。但是相比之下,仍然有多肽分子進(jìn)入正常產(chǎn)生作用。在整個(gè)滲透進(jìn)程中,多肽與膜之間的靜電作用為關(guān)鍵,因此削弱兩者之間的靜電引力就會(huì)降低多肽的內(nèi)攝作用,從而降低其。組氨酸的pKa ≈ 6.5,含組氨酸的多肽在pH ≤6.5時(shí) 會(huì)發(fā)生質(zhì)子化而帶正電荷,而在pH 7.4時(shí)大部分不帶電荷。為了克服TK特異性低、大的缺點(diǎn),以TK[AGYLLGKINLKKLAKL(Aib)KKIL-NH2]為模板,將序列中的賴(lài)氨酸替換為組氨酸,了一種的具有pH選擇性且低的穿膜肽TH[AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL-NH2][19]。研究發(fā)現(xiàn),與母肽TK相比,在pH 7.4條件下,TH及穿膜活性降低; 當(dāng)pH 6.0時(shí),TH的、穿膜活性與pH 7.4時(shí)相比增。然而,母肽TK的活性在不同pH條件下并沒(méi)有差別。這些結(jié)果均證明,TH在正常條件下不能被,但在酸性中能夠被。這種酸穿膜肽能選擇性地?cái)y帶小分子、納米顆粒、膠束、聚合物、寡核苷酸、蛋白質(zhì)或熒光標(biāo)記物分子進(jìn)入,以滿(mǎn)足應(yīng)用需要。

1.1.2 pH響應(yīng)性穿膜肽修飾的脂質(zhì)體

近年 來(lái),納米已經(jīng)成為惡性的研究[20]。實(shí)體的滲透和滯留效應(yīng)(enhanced permeabilityandretention effect,EPR effect),使得脂質(zhì)體能地累積于組織,降低游離的,從而引起了人們的[21]。人們常采用可裂解的聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG) 對(duì)CPPs進(jìn)行修飾,制成納米載體,以降低傳統(tǒng)CPPs的非特異性滲透。由于微呈弱酸性,增CPPs特異性的手段是對(duì)其進(jìn)行修飾改造,使之具有pH響應(yīng)性[22]。

由TP10衍生而來(lái)的TH具有的pH性,并且TH與喜樹(shù)堿(camptothecine,CPT) 的共軛物TH-CPT能優(yōu)入酸性中的[19]?；谝陨涎芯?/span>,Zhang等[23]將TH引入到脂質(zhì)體中,設(shè)計(jì)了一種pH響應(yīng)性穿膜肽修飾的脂質(zhì)體TH- Lip。由于TH具有pH 性,在及正常組織中,TH的穿膜活性被掩蔽; 當(dāng)TH-Lip到達(dá)組織,TH序列中的組氨酸質(zhì)子化,使得TH-Lip表面電荷由負(fù)轉(zhuǎn)為正,TH的穿膜活性被,使對(duì)TH-Lip的攝取增加。體外研究發(fā)現(xiàn),包載紫杉醇 (paclitaxel,PTX) 的脂質(zhì)體PTX-TH-Lip能地抑制,誘導(dǎo)凋亡,且具有pH依賴(lài)性。體內(nèi)研究表明,TH-Lip保留了脂質(zhì)體的長(zhǎng)特性,使其到達(dá)組織后盡可能多地被攝取,從而避免了其他組織 (如、脾臟和等) 對(duì)TH-Lip的非特異性攝取。

TH-Lip為pH響應(yīng)性穿膜肽修飾的傳遞提供了一個(gè)的視角,繞開(kāi)正常組織或器官,直接到達(dá)組織發(fā)揮抗作用。

雖然TH-Lip表現(xiàn)出的pH性,卻不能主動(dòng)靶向特定的位點(diǎn)。靶向配體肽c (RGDfK) 是整合素ανβ3的配體[24, 25],由于整合素ανβ3表達(dá)于B16F10、成膠質(zhì)及表面,因此Shi等[26]將RGDfK通過(guò)酯鍵連接到酸穿膜肽TH的C末端,了的肽鏈TR [c(RGDfK)-AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL-NH2],使TR不能夠特異性識(shí)別表面過(guò)表達(dá)的整合素ανβ3,而且具有pH響應(yīng)性穿膜活性。將TR修飾到脂質(zhì)體表面,得到一種的pH 響應(yīng)性脂質(zhì)體TR-Lip。體外研究結(jié)果表明,TR-Lip保持了的pH響應(yīng)性,并且呈現(xiàn)出與整合素ανβ3很的親和力。與TH-Lip相比,TR-Lip的在于它能主動(dòng)靶向整合素ανβ3過(guò)表達(dá)的。在pH 6.5條件下,將PTX包載于脂質(zhì)體中形成的PTX-TR-Lip抑制B16F10活性比PTX-TH-Lip。該課題組以注射B16F10的荷小鼠為模型,研究了TR-Lip生物分布及PTX-TR-Lip體內(nèi)抗活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),TR-Lip能聚積于組織; 與對(duì)照組相比,PTX-TR-Lip能抑制組織的,其抑制率也于PTX-TH-Lip組。有趣的是,PTX-TR-Lip組的荷小鼠存活率,這可能與PTX-TR-Lip地抗活性有關(guān)。

總之,由于TR-Lip具有pH響應(yīng)性,又能主動(dòng)靶向特定的位點(diǎn),進(jìn)而可以大幅度地降低全身性。然而TR-Lip也存在不足之處,雖然它的抗活性得到了提,但pH性與TH-Lip相比略有降低。如果能克服此缺點(diǎn),將其成為疏水性抗的長(zhǎng)載體將具有的。此外,Jiang等[27]用pH響應(yīng)性穿膜肽R6H4 (RRRRRR HHHH-NH2) 和透明質(zhì)酸 (hyaluronic acid,HA) 共修飾得到一種雙功能靶向脂質(zhì)體HA-R6H4-L,也表現(xiàn)出的pH響應(yīng)性靶向功能。

1.2 pH響應(yīng)性多肽自組裝釋放

自組裝多肽及其衍生物由于其的生物相容性、化學(xué)多樣性及生物識(shí)別能力,受到了大的。,利用pH、溫度、光照、和化學(xué)物質(zhì)等外部條件刺激來(lái)調(diào)節(jié)多肽及其衍生物的自組裝,使其運(yùn)用于各個(gè)方面,如組織工程、遞送、傷口及的篩選等。在這些外部條件中,pH的應(yīng)用為,特別是在控制釋放方面。因此,將pH響應(yīng)性智能載體用于抗的靶向遞送具有可能性。

Liang等[28]基于多肽自組裝,設(shè)計(jì)出一種pH型兩親性多肽分子 (VVVVVVKKGRGDS) 作為抗的載體。該多肽分子親水端頭部為KKGRGDS序列,其中兩個(gè)賴(lài)氨酸殘基能提供pH響應(yīng)能力,并入RGD序列賦予兩親性多肽分子靶向功能; 疏水端尾部為VVVVVV序列,這6個(gè)纈氨酸殘基具有疏水性側(cè)鏈,能提供疏水性相互作用以進(jìn)兩親性多肽分子的聚集和自組裝。在中性或堿性介質(zhì)中,這種兩親性多肽分子通過(guò)氫鍵及疏水相互作用自組裝成球形膠束,若改變介質(zhì)的pH使其變?yōu)樗嵝?/span>,兩個(gè)賴(lài)氨酸殘基離子化,靜電排斥作用會(huì)阻止兩親性多肽分子自組裝,導(dǎo)致膠束解離。將阿霉素(doxorubicin,DOX) 包封于兩親性多肽分子形成的自組裝膠束中,研究了pH的改變對(duì)釋放的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在中性介質(zhì)中 (pH7.0) DOX的釋放,而在酸性介質(zhì)中 (pH 5.0) DOX釋放迅速。當(dāng)這種包封了DOX的自組裝膠束與HeLa及COS7共孵育時(shí),由于HeLa表面有過(guò)表達(dá)的RGD受體(如ανβ3,ανβ5)[29]使該膠束能利用RGD序列的靶向功能,繞開(kāi)COS7,將DOX靶向輸送HeLa,從而特異性殺死的目的。注意的是,這種兩親性多肽分子表現(xiàn)出的很低。

因此,將這種pH 響應(yīng)性自組裝釋放作為抗的載體,不靶向性好、性,而且能夠?qū)崿F(xiàn)控制釋放,具有的應(yīng)

pH依賴(lài)性電荷反轉(zhuǎn)傳遞

,pH依賴(lài)性電荷反轉(zhuǎn)傳遞在控制釋放及靶向傳遞方面展現(xiàn)了大的性。這種pH依賴(lài)性電荷反轉(zhuǎn)傳遞一旦受到外部pH的刺激,自身所帶的負(fù)電荷會(huì)轉(zhuǎn)化為正電荷,從而發(fā)揮其相應(yīng)作用。注意的是,納米粒表面所帶的電荷在內(nèi)化及穩(wěn)定性中扮演著角色。這種電荷反轉(zhuǎn)納米粒在中性條件下 (如在中) 能夠保持初所帶的負(fù)電荷,從而抑制其與血清蛋白及正常組織的非特異性結(jié)合; 一旦到達(dá)組織或核內(nèi)體就會(huì)迅速反轉(zhuǎn)為正電荷形式,進(jìn)組織對(duì)電荷反轉(zhuǎn)納米粒的攝取,實(shí)現(xiàn)控制釋放。

Han等[30]運(yùn)用pH依賴(lài)性電荷反轉(zhuǎn)策略,設(shè)計(jì)了一種的pH性電荷反轉(zhuǎn)聚合多肽納米粒PPDTS[PLLeu-PLL(DMA)-Tat(SA)]。這種納米粒能將抗靶向輸送組織,由于組織具有微酸性外 (pH ≈ 6.5),并且中的核內(nèi)體也呈弱酸性 (pH ≈ 5.0),因此該納米粒通過(guò)對(duì)組織微酸性的逐級(jí)響應(yīng),提了對(duì)抗的攝取。這種pH性電荷反轉(zhuǎn)聚合多肽納米粒的基本結(jié)構(gòu)為聚L-賴(lài)氨酸-聚-L-亮氨酸二嵌段共聚物(PLLeu-PLL),將賴(lài)氨酸上的-NH2用2,3-二甲基馬來(lái)酸酐酰胺化后形成β-羧酰胺,使得該聚合多肽自組裝成帶負(fù)電荷的納米粒。通過(guò)鏈接反應(yīng)將聚合多肽與核靶向肽Tat共價(jià)連接在一起,然后用琥珀酰氯將Tat上的兩個(gè)賴(lài)氨酸和一個(gè)谷氨酸殘基酰胺化,掩蔽了其所帶的正電荷及穿膜功能,這樣就抑制了Tat的非特異性攝取。這種pH性電荷反轉(zhuǎn)聚合多肽納米粒的響應(yīng)機(jī)制 為: 當(dāng)PPDTS到達(dá)微酸性的組織,β-羧酰胺就 會(huì)水解,使得納米粒由負(fù)電荷轉(zhuǎn)化為正電荷,然后迅速被內(nèi)化。當(dāng)納米粒被內(nèi)化進(jìn)入到酸性的核內(nèi)體中時(shí),Tat琥珀酰胺進(jìn)一步水解,使得Tat靶向核的功能被,導(dǎo)致納米粒多地進(jìn)入核。該課題組將抗DOX包封于納米粒中,形成PPDTS/DOX,當(dāng)該微粒到達(dá)核后,DOX就會(huì)被釋放,累積于核,發(fā)揮抗作用。

這種pH依賴(lài)性電荷反轉(zhuǎn)傳遞的 是: 有助于同時(shí)實(shí)現(xiàn)靶向攝取和抗的核遞送。為抗的靶向遞送研究提供了思路。

1.4 pH性寡肽介導(dǎo)的遞送1.4.1 pH響應(yīng)性寡肽自組裝納米粒

組織微的標(biāo)志之一就是失調(diào)的pH值。利用這一特點(diǎn)設(shè)計(jì)出一種具有特異性及性的成像探針靶向作用于微。大多數(shù)pH性納米粒都是由長(zhǎng)鏈聚合而成的,對(duì)于pH的刺激響應(yīng)慢。智能pH響應(yīng)性納米粒,大的在于對(duì)pH的變化能應(yīng)答。如果納米粒的反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),就會(huì)重進(jìn)入,導(dǎo)致其靶向的效率降低[31]。Zhao等[32]設(shè)計(jì)了一種基于寡肽自組裝的仿生納米結(jié)構(gòu) —— pH肽KS5-DEAP2分別與熒光染料A488、熒光猝滅劑BHQ-5共價(jià)連接后自組裝形成的雜合肽納米粒,只要微pH發(fā)生輕微改變 (由7.4變?yōu)?/span>6.8),這種納米粒就能地從自組裝期 (熒光猝滅) 切換解離期 (有熒光)。該課題組利用異種移植小鼠模型,通過(guò)內(nèi)注射的方式,研究了寡肽自組裝納米粒的體內(nèi)成像。結(jié)果顯示,注射1.5 h內(nèi),隨著時(shí)間的推移,內(nèi)的熒光逐漸增; 1.5h后,內(nèi)的熒光度逐漸降低。說(shuō)明一旦該探針遇到酸性的微就會(huì)迅速并解離,從而產(chǎn)生的熒光信號(hào)。有趣的是,與不易解離的多肽組裝體相比,這種pH響應(yīng)性寡肽自組裝納米粒在內(nèi)的熒光信號(hào)度消退速度快。這就意味著,自組裝納米粒的解離組分一旦被為小分子物質(zhì),就會(huì)通過(guò)自由擴(kuò)散從機(jī)體內(nèi)。此外,研究發(fā)現(xiàn)熒光染料主要定位于膜水平。

由于這種pH響應(yīng)性自組裝寡肽納米粒對(duì)酸性微的靈敏度,且能及時(shí)從機(jī)體內(nèi),若將其作為的熒光探針應(yīng)用于,具有一定的準(zhǔn)確性和性。

1.4.2 pH性寡肽與穿膜肽的重組體

MAP(KLALKLALKALKAALKLA) 是一種兩親性CPPs,能通過(guò)胞吞作用攜帶多種生物活性分子進(jìn)入內(nèi),但是作為載體又缺乏特異性。組氨酸-谷氨酸(histidine-glutamic acid,HE) 共聚物是一種pH 度性序列,為了阻止MAP非特異性攝取,Zaro 等[33]運(yùn)用生物技術(shù)手段將寡肽HE與穿膜肽MAP融合在一起,得到一種重組體HE-MAP,并被谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移(glutathione-S-transferase,GST) 表達(dá)為融合蛋白GST-HE-MAP。在該研究中,GST一方面作為標(biāo)記物用于蛋白的純化,另一方面作為貨物蛋白用于研究重組體HE-MAP的物質(zhì)傳遞功能是否具有pH依賴(lài)性。結(jié)果顯示,在pH ≤ 6.8時(shí),GST- HE-MAP能與HeLa度結(jié)合并被內(nèi)化; 當(dāng)pH > 7時(shí),GST-HE-MAP與HeLa的結(jié)合及內(nèi)化降低,說(shuō)明HE賦予了該融合蛋白度的pH性。這主要是由于組氨酸 (pKa ≈ 6.5) 在pH 7.4時(shí)不帶電荷,而帶負(fù)電荷的谷氨酸 (pK a ≈ 4) 與帶正電荷的賴(lài)氨酸 (pKa ≈ 10) 或精氨酸 (pKa ≈ 12) 通過(guò)靜電相互作用可以屏蔽MAP上的正電荷。一旦重組體HE-MAP暴露于微酸性,組氨酸發(fā)生質(zhì)子化而帶正電荷,導(dǎo)致谷氨酸殘基與MAP上的陽(yáng)離子殘基之間的靜電相互作用被解除,從而使MAP的穿膜活性被。

基于上述研究,Fei等[34]又將寡肽HE重復(fù)序列(HE)10與MAP融合,探究了融合蛋白GST-(HE)10- MAP在荷小鼠體內(nèi)的分布情況。結(jié)果證實(shí),在正常條件下 (HE)10能夠掩蔽MAP的穿膜活性,導(dǎo)致GST-(HE)10-MAP選擇性地分布在微酸性的位點(diǎn)。

(HE)n重復(fù)序列與CPPs融合得到的重組體 (HE)n-CPPs,若改變 (HE)n重復(fù)序列的長(zhǎng)度,是否能夠調(diào)節(jié)CPPs所帶的正電荷數(shù)目,從而使得CPPs的穿膜活性發(fā)生不同程度的改變?；谶@個(gè)假設(shè),Sun等[35]將寡肽序列 (HE)n (n = 8,10,12) 分別與陽(yáng)離子穿膜肽YG(RG)6、YGR6G6連接,形成六種結(jié)構(gòu)不同的重組體 [(HE)8-YG(RG)6、(HE)10-YG(RG)6、(HE)12-YG(RG)6、(HE)8-YGR6G6、(HE)10-YGR6G6和 (HE)12-YGR6G6],并考察了這6種重組體與HeLa的表面結(jié)合及攝取是否具有pH性。結(jié)果顯示,(HE)10-YGR6G6的pH性。通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比發(fā)現(xiàn),重組體的pH性與它們的二級(jí)結(jié)構(gòu)及(HE)n重復(fù)序列的長(zhǎng)度有關(guān); 也與CPPs 中精氨酸的排列順序有關(guān)。

根據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)報(bào)道,可以推測(cè)若將這種pH性重組體 (HE)n-CPPs作為傳統(tǒng)抗的載體,不能克服CPPs選擇性差、正電荷多等缺點(diǎn),又能提傳統(tǒng)抗的水溶性、組織滲透能力及在組織的分布。此外,也可以將熒光探針與這種pH性重組體 (HE)n-CPPs連接,應(yīng)用于。因此,pH性寡肽與穿膜肽的重組體在抗靶向遞送,特別是在大分子療法方面具有一定的應(yīng)用。

1.4.3 pH性寡肽與穿膜肽共修飾聚合物膠束

為了抑制機(jī)體對(duì)抗的非特異性攝取,同時(shí)提聚乙二醇-聚乳酸 (poly(ethylene glycol)- poly(D,L-lactide),PEG-PLA)聚合物膠束的物理穩(wěn)定性以及靶向性,Quahab等[36]用pH性寡肽 (HE)5與穿膜肽 (RG)5對(duì)PEG-PLA聚合物膠束進(jìn)行共修飾,將 (HE)5、(RG)5分別連接到PEG-PLA的聚乙二醇末端,使得組裝后多肽分子位于膠束表面 (PHPO)。同時(shí),將抗多烯紫杉醇(docetaxel,DTX) 包封于聚合物膠束PHPO中,制成聚合物膠束DTX-PHPO。研究發(fā)現(xiàn),DTX-PHPO的體外釋放及攝取具有的pH依賴(lài)性。這主要?dú)w功于寡肽(HE)5的pH性[33, 34]。在pH 7.4時(shí),膠束表面的 (HE)5通過(guò)靜電相互作用屏蔽了(RG)5的穿膜活性; 一旦該膠束進(jìn)入酸性微,(RG)5發(fā)生去屏蔽,其穿膜活性被,介導(dǎo)膠束進(jìn)入,釋放出分子,進(jìn)而殺傷。

這種pH性寡肽與穿膜肽共修飾聚合 物膠束了DTX水溶性差的缺點(diǎn)。與大多數(shù)納米載體相似,該聚合物膠束也可以被動(dòng)靶向部位。又因其具有pH響應(yīng)性,當(dāng)?shù)竭_(dá)組織后,能攜帶多的難溶性大分子進(jìn)入。但是,若想使這類(lèi)載體有好的,pH性寡肽和穿膜肽的選擇關(guān),因?yàn)樗鼈冎g的靜電相互作用會(huì)直接影響到這類(lèi)聚合物膠束能否進(jìn)入到正常組織和器官而引起性作用。

1.5 pH型載體材料與穿膜肽共修飾納米粒

大多數(shù)靶向作用于組織的pH性多肽類(lèi)遞送,主要通過(guò)對(duì)肽鏈的修飾改造,使其在微酸性外中具有pH響應(yīng)能力。而將pH型的載體材料與穿膜肽結(jié)合,應(yīng)用于靶向型pH性多肽類(lèi)遞送的文獻(xiàn)報(bào)道并不多見(jiàn)。

1.5.1穿膜肽與pH型PEG共修飾脂質(zhì)體

為了延長(zhǎng)脂質(zhì)體在體內(nèi)的時(shí)間,其生物相容性,常見(jiàn)的方法是用PEG對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行修飾[37]。但是,PEG化后的脂質(zhì)體,其親水性表層會(huì)阻礙脂質(zhì)體與之間的相互作用,導(dǎo)致脂質(zhì)體不能及時(shí)與結(jié)合并內(nèi)化,降低了遞送效率。Zhang等[38]巧妙地用pH型PEG (PEG5K-Hz-PE) 和穿膜肽R8 (RRRRRRRR-NH2) 對(duì)脂質(zhì)進(jìn)行共修飾得到一種既有長(zhǎng)特性,又有pH響應(yīng)性的脂質(zhì)體Cl-Lip。在中該pH型PEG保持穩(wěn)定,可以屏蔽R8的穿膜活性。當(dāng)脂質(zhì)體通過(guò)EPR效應(yīng)靶向部位后,在組織酸性微的誘導(dǎo)下,連接PEG的化學(xué)鍵水解斷裂,使得該pH型PEG斷裂脫離脂質(zhì)體表面,R8去屏蔽化,介導(dǎo)脂質(zhì)體進(jìn)入到內(nèi)。

該pH型PEG與穿膜肽共修飾脂質(zhì)體,為靶向型pH性多肽類(lèi)遞送的設(shè)計(jì)提供了一個(gè)的思路?？梢赃M(jìn)一步將各型的穿膜肽 (如酸穿膜肽、具有主動(dòng)靶向功能的穿膜肽、裂解肽與穿膜肽的重組體) 運(yùn)用于此類(lèi)共修飾脂質(zhì)體,再將傳統(tǒng)抗包封于其中,發(fā)揮多重、靈敏、的靶向及抗作用。

1.5.2穿膜肽修飾的pH性膠束

聚合物膠束作為靶向遞送載體,因其在體內(nèi)穩(wěn)定性、生物相容性好和量大等,受到了[39]。Sethuraman等[40]研究發(fā)現(xiàn)聚合磺胺甲氧嘧啶[poly (methacryloylsulfadimethoxine),PSD],在pH 7.4時(shí)帶負(fù)電荷,而當(dāng)pH低于7.0時(shí)帶正電荷,因此,在正常條件下PSD能地屏蔽CPPs所帶的正電荷。Tat (YGRKKRRQRRR-NH2) 是的穿膜肽,具有*的穿透力且能直接作用于核?；谝陨涎芯?/span>,Cheng等[41]利用pH性的硬脂酰磺胺甲氧嘧啶 (stearyl sulfadiazine,SA-SD)、穿膜肽Tat和mPEG2000-DOPE修飾的聚乙二醇化磷脂,制備得到包載DOX的聚合物膠束。由于硬脂?；前芳籽踵奏ぞ哂?/span>pH性,在pH 7.4條件下,帶負(fù)電荷的SA-SD通過(guò)靜電相互作用將Tat隱蔽在聚合物膠束內(nèi),使其穿膜活性受到抑制; 當(dāng)pH < 7.0時(shí),SA-SD所帶電荷由負(fù)轉(zhuǎn)為正,靜電相互作用被解除,使得Tat從膠束內(nèi)核解離,暴露于膠束表面,介導(dǎo)膠束進(jìn)入,從而選擇性地殺傷 (圖 1)。

這種pH性聚合物膠束的大是,充分利用了載體材料的pH特型與穿膜肽的穿膜活性。特別是在正常條件下,CPPs被隱藏在聚合物膠束內(nèi)部,只有PEG鏈暴露在膠束表面,使得該載體具有長(zhǎng)的特性。而當(dāng)其到達(dá)部位后,在酸性微的誘導(dǎo)下,聚合物膠束發(fā)生去屏蔽,使得CPPs的穿膜活性被,進(jìn)而將所載抗靶向遞送內(nèi)。若能將特異性識(shí)別的單克隆抗體或配體與CPPs連接,進(jìn)一步制成具有主動(dòng)靶向功能的pH性聚合物膠束,由于實(shí)體的EPR效應(yīng),使得該pH性聚合物膠束不能夠被動(dòng)靶向累積于組織,而且能夠主動(dòng)靶向并介導(dǎo)抗進(jìn)入,可能會(huì)降低性。

西安瑞禧生物科技有限公司主要通過(guò)脂質(zhì)體和二親共聚物膠束偶連多種多肽類(lèi)產(chǎn)品應(yīng)用于傳遞，主要材料有DSPE-PEG-多肽，DPPE-PEG-多肽，DOPE-PEG-多肽，PLGA-PEG-多肽，PLA-PEG-多肽，PCL-PEG-多肽，DSPE-多肽 具體詳細(xì)產(chǎn)品如下：

1：穿膜肽

穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs) 是一種由10～30個(gè)氨基酸殘基組成的陽(yáng)離子短肽。穿膜肽能介導(dǎo)多種物質(zhì)進(jìn)入,如DNA、蛋白質(zhì)、抗體、顯像劑、納米粒和脂質(zhì)體等。將CPPs與傳統(tǒng)的抗 (如紫杉醇、喜樹(shù)堿和鬼臼等) 共價(jià)連接后,能提這些的抗活性,同時(shí)也增了這些的水溶性、組織滲透力及在組織中的分布。然而,由于穿膜肽的選擇性較差、正電荷多而引起的體內(nèi)、穩(wěn)定性差等問(wèn)題,使其在體內(nèi)的應(yīng)用受到了限制。因此,研究者想出了很多策略以提穿膜肽的靶向性,如將特異性靶向配體與穿膜肽結(jié)合,或制成靶向配體與穿膜肽共修飾納米粒和脂質(zhì)體

CPPs 的分類(lèi)以及統(tǒng)一的術(shù)語(yǔ)還沒(méi)有。根據(jù)不同的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn), 得到不同的。近有學(xué)者根據(jù)短肽的特點(diǎn)和來(lái)源將其分為3大類(lèi):蛋白衍生肽(protein derived CPPs), 如penetratin、TAT和pVEC等； 模型肽(model peptides) 如MAP和(Arg)7等；設(shè)計(jì)肽(designed CPPs)如MPG和Transportan等。從其兩親性性質(zhì)也可將其分為3類(lèi):兩親性CPPs (PaCPPs), 如MPG、 transportan、TP10、Pep-1;中等兩親性CPPs (SaCPPs),如penetratin, RL16；非兩親性CPPs (NaCPPs),如 R9。

西安瑞禧生物可以提供對(duì)應(yīng)的產(chǎn)品有：

DSPE-PEG-穿膜肽CPPs

DPPE-PEG-穿膜肽CPPs

DOPE-PEG-穿膜肽CPPs

PLGA-PEG-穿膜肽CPPs

PCL-PEG-穿膜肽CPPs

PLA-PEG-穿膜肽CPPS

DSPE-穿膜肽CPPs

DOPE-穿膜肽CPPs

部分穿膜肽：

TAT (YGRKKRRQRRR-NH2) 是的穿膜肽,具有*的穿透力且能直接作用于核.

MAP(KLALKLALKALKAALKLA) 是一種兩親性CPPs,能通過(guò)胞吞作用攜帶多種生物活性分子進(jìn)入內(nèi),但是作為載體又缺乏特異性

具有pH選擇性且低穿膜肽TH[AGYLLGHINLHHLAHL(Aib)HHIL-NH2]

pH響應(yīng)性穿膜肽R6H4 (RRRRRR HHHH-NH2)

MPG (ac-GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV-cys)

MPGΔNLS (ac-GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKSKRKV-cys)

Stearyl-R8 (st-RRRRRRRR-NH2)

EB1 (LIKLWSHLIHIWFQNRRLKWKKK-amide)

Tat-DRBD (GRKKRRQRRRPQ-DRBD)

PF6 (St-AGYLLGK[kk2sa4qn4]INLKALAALAKKIL-NH2)

部分產(chǎn)品：

DSPE-PEG-TAT  

DPPE-PEG-TAT  

DOPE-PEG-TAT  

DSPE-TAT       

PLGA-PEG-TAT

PLA-PEG-TAT

PCL-PEG-TAT

DSPE-PEG-R8(RRRRRRRR-NH2)

PLGA-PEG-R8

PLA-PEG-R8

PCL-PEG-R8

2：主動(dòng)靶向多肽GE11 （表皮因子肽）

多肽GE11是通過(guò)噬菌體肽庫(kù)篩選技術(shù)獲得的小分子多肽，由11個(gè)氨基酸組成（YHWYGYTPQNVI），與大分子配體相比，多肽配體的：相對(duì)分子分子質(zhì)量小，原性低；易擴(kuò)散及靶向性，可以滿(mǎn)足靶向的要求；對(duì)的沒(méi)有影響。研究表明，GE11可以與EGFR特意性結(jié)合，并且GE11對(duì)的沒(méi)有影響。研究結(jié)果表明GE11修飾的脂質(zhì)體對(duì)EGFR具有較的靶向性。GE11修飾的膠束，以EGFR為靶點(diǎn)，結(jié)果表明制備的主動(dòng)靶向EGFR的膠束加速對(duì)的攝取，EGFR在非小表面過(guò)度表達(dá)。

EGFR的靶向多肽GE11，該多肽已經(jīng)被應(yīng)用于和的靶向?qū)?。磷脂膠束具有的組織穿透性，對(duì)其引入靶向性有可能獲得好的組織聚集效果

多肽GE11 序列號(hào)：（YHWYGYTPQNVI）

西安瑞禧生物科技有限公司可以提供的產(chǎn)品有：

DSPE-PEG-GE11

DPPE-PEG-GE11

DMPE-PEG-GE11

DOPE-PEG-GE11

DSPE-GE11

PLGA-PEG-GE11

PCL-PEG-GE11

PLA-PEG-GE11

3：活性腸肽

活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)是由14種28個(gè)氨基酸殘基組成的堿性多肽，屬于胰泌素/VIP 族的胃腸肽類(lèi)。

4：YIGSR多肽修飾的脂質(zhì)體 

YIGSR(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg)(酪氨酸-異亮氨酸-甘氨酸--精氨酸)是來(lái)源于層粘連蛋白(laminin，LN)分子β1鏈的序列，能干擾膜黏附分子與基底膜和外基質(zhì)的黏附，可抑制纖維肉和黑素的和轉(zhuǎn)移。YIGSR肽具有抗生成的作用，不但可以抑制轉(zhuǎn)移灶，而且可以抑制原發(fā)灶的。將YIGSR肽連接到脂質(zhì)體表面，用脂質(zhì)體作為YIGSR肽的載體，在體內(nèi)可減少對(duì)YIGSR肽的破壞，增抗轉(zhuǎn)移效果，地抑制實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移和自發(fā)性轉(zhuǎn)移

多肽YIGSR  序列號(hào)：(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg)(酪氨酸-異亮氨酸-甘氨酸--精氨酸)

西安瑞禧生物科技有限公司可以提供的產(chǎn)品有：

DSPE-PEG-YIGSR

DPPE-PEG-YIGSR

DMPE-PEG-YIGSR

DSPE-YIGSR

PLGA-PEG-YIGSR

PCL-PEG-YIGSR

PLA-PEG-YIGSR

5：NGR多肽修飾的脂質(zhì)體 （生靶向肽）

NGR多肽是一種能與生內(nèi)皮上的CD13受體結(jié)合的靶向肽。將NGR多肽與脂質(zhì)體相連接，得到NGR多肽修飾的脂質(zhì)體。通過(guò)靜脈注射該脂質(zhì)體，NGR多肽能與生上的CD13受體結(jié)合，將脂質(zhì)體定位于組織，使得脂質(zhì)體中的濃集于部位，從而提抗效果。該文從NGR多肽入手，對(duì)NGR多肽的定義、NGR多肽修飾的脂質(zhì)體。