抗酒石酸酸性磷酸酶染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：雞表皮生長(zhǎng)因子(EGF)試劑盒Anti-PRAME Antibody抗藥蛋白抗體
雞趨化因子C-C-基元配體1(CCL1)試劑盒Anti-PPP3CA Antibody性磷蛋白24抗體
雞黑色素瘤關(guān)聯(lián)硫酸軟骨素蛋白聚糖(MCSP)試劑盒 Anti-PPP2CA Antibody(0362)液泡蛋白分選受體SORCS3抗體
雞磷脂爬行酶2(PLSCR2)

產(chǎn)品分類：酶類染色

儲(chǔ)存條件：—20℃,避光,6個(gè)月

用途：TRAP染色液，細(xì)胞和組織的抗酒石酸酸性磷酸酶染色。

注意事項(xiàng)：主要由萘酚、六氮化對(duì)品紅、亞硝酸鈉等組成,染色后酶活性部位呈紅色。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

表告依春（標(biāo)準(zhǔn)品） 1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HClIQCF1蛋白抗體包裝5g

表戈米辛O（標(biāo)準(zhǔn)品） 1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HClIQCJ蛋白抗體包裝1g

表沒食子兒茶（標(biāo)準(zhǔn)品） Manidipine Dihydrochlorid抑制結(jié)合蛋白抗體包裝25g

表沒食子兒茶沒食子酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Manidipine Dihydrochlorid免疫球蛋白超家族成員3抗體包裝5g

表木栓（標(biāo)準(zhǔn)品） Stanolone/Androstanolone免疫球蛋白超家族成員6抗體包裝1g

表小檗堿（標(biāo)準(zhǔn)品） Doramectin免疫球蛋白超家族成員9抗體包裝1g

別隱品堿;A-別隱品堿(標(biāo)準(zhǔn)品) 3,3',5'-Triiodo-L-thyronine免疫球蛋白超家族成員10抗體包裝5g

濱蒿內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Corylifol A大腦和特異性免疫球蛋白超家族成員11抗體包裝1g

檳榔（標(biāo)準(zhǔn)品） Bromfenac sodium干擾α受體抗體包裝25g

檳榔花（標(biāo)準(zhǔn)品） Bromfenac sodium磷化干擾α受體抗體包裝5g

波棱瓜子（標(biāo)準(zhǔn)品） Flupenthixol dihydrochloride磷化胰島受體β抗體包裝1g

波棱 Tea polyphenol核因子κB抑制蛋白E抗體包裝5g

博落回（標(biāo)準(zhǔn)品） Tetrahydrocurcumin磷化整合β4抗體包裝1g

薄荷（標(biāo)準(zhǔn)品） Tubuloside A磷化整合β4抗體包裝10MG

補(bǔ)骨脂（標(biāo)準(zhǔn)品） 2'-AcetylacteosideIQCD蛋白抗體包裝100g

伯克霍爾德氏菌Burkholderia│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品醌NADH脫氫1試劑盒葫蘆巴堿;Trigonelline

魯錐梗孢Dissoconium│luensis G.Y. Sun X.R.Zhai& Rong Zhang 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR跨膜結(jié)構(gòu)域4亞家族成員11試劑盒紅花八角;Dunnianol

黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品空泡相關(guān)蛋白A試劑盒紅松內(nèi)酯;Pinusolide
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液Tau protein  微管相關(guān)蛋白（抗原）規(guī)格： 0.5mg

TGF- BetaR1/ALK-5(TGF-beta receptor type I)  轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體1（抗原）規(guī)格： 0.5mg

Thy-1/CD90  CD90(抗原)規(guī)格： 0.5mg

Thioster-containing protein 1  硫酯包含蛋白-1(抗原)規(guī)格： 0.5mg

TIGAR humen (TP53- induced glycolysis and apoptosis-regulator )  P53誘導(dǎo)糖酵解和凋亡調(diào)節(jié)因子蛋白（抗原）規(guī)格： 0.5mg