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公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
維多利亞藍彈力纖維染色液 | 4×50ml | FS-R6724 |
產(chǎn)品分類:結(jié)締染色
儲存條件:室溫,避光,12個月
用途:彈力纖維染色,乙型肝炎表面抗原物質(zhì)染色
注意事項:彈力纖維呈藍色,胞核呈紅色
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
巖白菜(標準品) L-Glutamic acid γ-benzyl ester羥基類固脫氫3α抗體包裝5g
巖大戟內(nèi)酯B(標準品) L-Phenylalanine benzyl ester hydrochloride 同源異型盒基因HLX1蛋白抗體包裝1g
巖黃連(標準品) L-Proline benzyl ester hydrochloride三羥基三基合成1包裝25g
鹽巴馬,鹽掌葉防己堿(標準品) L-Arginine L-glutamate熱休克因子1抗體包裝5g
鹽川芎(標準品) L-Arginine AKG 2:1磷化熱休克因子1抗體包裝1g
鹽番茄堿(標準品) S-Acetamidomethyl-L-cysteine hydrochloride熱休克蛋白71抗體包裝1g
鹽黃柏堿(標準品) O-tert-Butyl-L-threonine methyl ester hydrochloride微絲相關(guān)蛋白hHBrk1抗體包裝250mg
鹽黃連堿(標準品) L-Alanine isopropyl ester hydrochloride植烷酰羥化2抗體包裝5g
鹽毛果蕓香堿(標準品) Methyl L-asparaginate monohydrochlorideA型流感病H9N1神經(jīng)型抗體包裝1g
鹽青藤堿(標準品) L-Aspartic acid di-tert-butyl ester hydrochlorideA型流感病H9N1血凝型抗體包裝500mg
鹽去氫駱駝蓬堿(標準品) L-Glutamine t-butyl ester hydrochloride人類狀瘤病33抗體包裝1g
鹽石蒜堿(標準品) L-Glutamic acid 5-tert-butyl 1-methyl ester hydrochloride A型病H1N1蛋白抗體包裝25g
鹽甜菜堿(標準品) Bzl-Gly-OH·HCl型肝炎病聚蛋白VP1抗體包裝5g
鹽小檗(標準品) Glycine benzyl ester hydrochloride造血干特異性蛋白抗體包裝1g
鹽小檗堿(標準品) L-Isoleucine t-butyl ester hydrochloride轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝250mg
CIP108594=LMG21772資源名稱: 熱帶伯克霍爾德氏菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品卵清蛋白特異性IgE試劑盒奎寧;Quinine
海科貝特氏菌Cobetia│marina 質(zhì)量規(guī)格:>98%卵清白蛋白苦馬豆;Swainsonine
鞘桿菌屬Sphingobacterium sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%卵泡抑樣蛋白1試劑盒苦玄參苷IA;Picfeltarraen
維多利亞藍彈力纖維染色液Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ARC(多肽抗原)規(guī)格: 0.5mg
Angiotensin II receptor(Ang II ) 血管緊張suⅡ受體(抗原)規(guī)格: 0.5mg
Akt/PKC(Protein Kinase C,PKC) 蛋白激meiC(多肽抗原)規(guī)格: 0.5mg
Beta1-adrenergic receptor 腎上腺su能受體β1(抗原)規(guī)格: 0.5mg
Annexin V 膜粘連蛋白-5(抗原)規(guī)格: 0.5mg
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。