商品介紹:
測(cè)定意義: DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動(dòng)物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛,其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān),能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和受損傷程度。 測(cè)定原理: DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫,外源添加過量的辣根過氧化物酶,催化過氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成有色物質(zhì),在460nm處有特征吸收峰,通過測(cè)定該波長(zhǎng)吸光度增加速率,計(jì)算DAO活性。 需自備的儀器和用品: 天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、蒸餾水。 |
商品屬性:
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
環(huán)胍肽(CCP)英文名:CCP ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框151抗體包裝1g
踝蛋白(TLN)英文名:TLN ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框78抗體包裝1g
花生四烯-5-脂加氧(ALOX5)英文名:ALOX5 ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框187抗體包裝25g
花生四烯-15-脂加氧(ALOX15)英文名:ALOX15 ELISA Kit21號(hào)染色體開放閱讀框59抗體包裝5g
花生四烯-12-脂加氧(ALOX12)英文名:ALOX12 ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框152抗體包裝500g
亨廷頓蛋白(HTT)英文名:HTT ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框165抗體包裝100g
黑瘤細(xì)胞黏附分子(MCAM)英文名:MCAM ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框166抗體包裝25g
黑色瘤抗原家族A1(MAGEA1)英文名:MAGEA1 ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框173抗體包裝500g
核因子κB抑制因子α(IκBα)英文名:IκBα ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框24抗體包裝1g
核因子κB受體激活因子配基(RANκL)英文名:RANκL ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框30抗體包裝250mg
核因子κB2(NFκB2)英文名:NFκB2 ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框4抗體包裝1g
核因子κB(NFκB)英文名:NFκB ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框7抗體包裝1g
核因子I/B(NFIB)英文名:NFIB ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框79抗體包裝5g
核纖層蛋白A/C(LMNA)英文名:LMNA ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框94抗體包裝1g
核糖核T2(RNASET2)英文名:RNASET2 ELISA Kit21號(hào)染色體開放閱讀框37抗體包裝5g
米根霉Rhizopus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品真核延伸因子2試劑盒異補(bǔ)骨脂二氫黃;Isobavachin
ATCC55739資源名稱: 羅伊氏乳桿菌 質(zhì)量規(guī)格:克林霉含量>758μg/mg,USP32真核起始因子4A - II試劑盒異連翹酯苷A;Isoforsythias
香菇18Lentinula│edodes (Berk.) Pegler 質(zhì)量規(guī)格:用于含量測(cè)定張力蛋白4試劑盒氧海堿;Oxoglaucine
二胺氧化酶(DAO)測(cè)試盒50管/24樣空腸彎曲桿 5--2-(4-苯氧基)-苯組織型纖溶原激活劑Elisa
生活飲用水 鈣、鎂 2-甲基-3-硝基-5-吡啶組織因子Elisa
食物鹽單胞 2-溴-3-氟異組織因子途徑抑制物Elisa
相思根瘤 3-甲酰基-4-甲氧基苯酸組織因子途徑抑制物2Elisa
釀酒酵母 頭孢羅齊門冬酰Elisa
產(chǎn)黃青霉 N-乙?;?5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]胞苷-3'-(肉堿Elisa
細(xì)鏈格孢(可訂購) 2,4-二叔戊基亮啡肽Elisa
產(chǎn)二鏈霉 三羰基(η-環(huán)戊二烯基)合錳二聚體甲啡肽Elisa
托木爾假單胞 5--1,3-二氟-2-苯DepakineElisa
枯草芽胞桿 1-Boc-2-甲基哌TegratolElisa
泛屬 對(duì)二乙酰氧基苯TRHRElisa
鷲峰假絲酵母 二二乙二酯BCAS4Elisa
派倫霉屬 五氟生物酯緊密連接蛋白5Elisa
天藍(lán)色鏈霉 6-乙氧基-2-巰基苯并噻唑糖化白蛋白Elisa
產(chǎn)朊假絲酵母 二苯甲酰對(duì)醌二肟Midline人1蛋白Elisa
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。