亞硫酸氫鈉溶液公司正在銷售的產(chǎn)品：綿羊可溶性間粘附分子1(sICAM-1)試劑盒Anti-HOXD10 AntibodyAlexa Fluor 488標(biāo)記大鼠IgG(流式同型對(duì)照)
綿羊皮膚T相關(guān)抗原(CTAGE)試劑盒 Anti-HOXD8 Antibody熒光素Cy5.5標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)
綿羊白介素22(IL-22)試劑盒Anti-HRH4 Antibody熒光素Cy5.5標(biāo)記羊I

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：染色其他

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：清洗切片中多余的染色

注意事項(xiàng)：主要由亞硫酸氫鈉、去離子水組成,注意密閉保存。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

灰黃青霉DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體Human MSC(Musculin) ELISA Kit人B受體相關(guān)蛋白31(BCAP31)免疫試劑盒

谷棒桿菌磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體Human CENPU (Centromere protein U) ELISA KIT人B生長(zhǎng)因子(BCGF)免疫試劑盒

釀酒酵母上皮粘附分子抗體Human MKL2 (MKL/myocardin-like protein 2) ELISA KIT人B淋巴瘤因子6(Bcl6)免疫試劑盒

香菇屬酪蛋白激受體B2抗體Human MOAP1 (Modulator of apoptosis 1) ELISA KIT人B淋巴瘤-XL(Bcl-xl)免疫試劑盒

少孢酵母表皮生長(zhǎng)因子抗體Human MAZ (Myc-associated zinc finger protein) ELISA KIT人B連接蛋白(BLNK)免疫試劑盒

*雞油菌都不能訂購(gòu)表皮生長(zhǎng)因子受體3抗體Human MOB2 (MOB kinase activator 2) ELISA KIT人B活化因子受體(BAFF-R)免疫試劑盒

突臍蠕孢菌酪蛋白激A4受體抗體Human MDGA1 (MAM domain-containing glycosylphosphatidylinositol anchor protein 1) ELISA KIT人B活化因子(BAFF)免疫試劑盒

雀黃鏈霉菌上皮鈣粘附分子抗體Human MPHOSPH10 (U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein MPP10) ELISA KIT人Bκ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)免疫試劑盒

鏈格孢紅生成受體抗體Human PRX(Periaxin) ELISA Kit人B群鏈球菌多糖抗體(IgG)免疫試劑盒

克魯斯假絲酵母腦啡肽抗體Human MKX(Homeobox protein Mohawk) ELISA Kit人B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫試劑盒

楊齒白木層孔菌EID2蛋白抗體Human MARCO (Macrophage receptor MARCO) ELISA KIT人B淋巴抗原(CD20)免疫試劑盒

大腸桿菌上皮粘附分子抗體Human  MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) ELISA Kit人blca-4 免疫試劑盒

淡紫擬青霉紅膜相關(guān)蛋白ERMAP抗體Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) ELISA KIT人blca-1 免疫試劑盒

菜豆間座殼腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體Human SEMG1(Semenogelin-1) ELISA Kit人Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)免疫試劑盒

擬粉紅鎖擲孢酵母腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體Human MAD1L1(Mitotic arrest deficient 1-like protein 1) ELISA Kit人B7-H4 免疫試劑盒

斯氏梭菌硫軟骨蛋白多糖3抗體Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) ELISA KIT人A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)免疫試劑盒

綠色木霉Trichoderma│viride 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=3%華蟾酥基

熒光假單胞菌生物型FPseudomonas│fluorescens biotype F 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品木蘭脂

多噬伯克霍爾德氏菌Burkholderia│multivorans 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)異飛薊賓
亞硫酸氫鈉溶液PA-IgM(Human Platelet associated antibody) ELISA Kit  人血小板相關(guān)IgM規(guī)格： 48T

FPA(Human fibrinopeptide A) ELISA Kit  人血纖肽/纖維蛋白肽A規(guī)格： 48T

Plg(Human Plasminogen) ELISA Kit  人纖溶mei原規(guī)格： 48T

CTLA-4/CD152(Human cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4) ELISA Kit  人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4規(guī)格： 48T

Lambda -IgLC(Human lambda immunoglobulin light chain) ELISA Kit  輕鏈lambda規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。