細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠抗生長(zhǎng)抗體(GHAb)試劑盒 Anti-Lgi1/EPT/LGI1 Antibody堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體
豚鼠核孔蛋白153kda(NUP153)試劑盒Anti-LHCGR Antibody珠蛋白抗體
豚鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)試劑盒Anti-LIF Antibody尿皮質(zhì)素抗體
豚鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒Ant

產(chǎn)品分類：細(xì)胞染色

儲(chǔ)存條件：—20℃,避光,12個(gè)月

用途：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡

注意事項(xiàng)：自備乙醇70%和PBS,流式細(xì)胞儀488nm處檢測(cè)紅色熒光

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

葛根-6''-O-木糖苷 Basic Fuchsin促卵泡激抗體包裝1g

葛根芹菜糖苷 Bromothymol blue神經(jīng)元核抗原抗體包裝5g

蛤蚧（標(biāo)準(zhǔn)品） Bismuthiol IIFAM135B蛋白抗體包裝1g

油（標(biāo)準(zhǔn)品） Bismuthiol II“衰老關(guān)鍵蛋白"抗體包裝5g

隔山消（標(biāo)準(zhǔn)品） Beryllon II促卵泡激受體抗體包裝25g

根皮苷（標(biāo)準(zhǔn)品） Bromopyrogallol red成纖維生長(zhǎng)因子12抗體包裝5g

根皮(標(biāo)準(zhǔn)品) Basic Fuchsin成纖維生長(zhǎng)因子14抗體包裝100ml

功勞木（標(biāo)準(zhǔn)品） Brilliant Yellow腦型脂肪結(jié)合蛋白抗體包裝25ml

鉤藤(鉤藤)（標(biāo)準(zhǔn)品） Congo redFAM96B蛋白抗體包裝5ml

鉤藤堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Calconcarboxylic acid腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體包裝1g

鉤吻（標(biāo)準(zhǔn)品） Calconcarboxylic acidFAM29蛋白抗體包裝25g

鉤吻子（標(biāo)準(zhǔn)品） Chlorophenol redMaFF相關(guān)蛋白抗體包裝5g

狗脊（標(biāo)準(zhǔn)品） Calmagite7抗體包裝100g

枸杞子（標(biāo)準(zhǔn)品） CadionFEM1B抗體包裝25g

枸櫞血根堿 Cupferron纖維母生長(zhǎng)因子3抗體包裝5g

黑曲霉Aspergillus│niger var. niger Tiegh. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品狀瘤病抗體試劑盒千金藤;Cepharanthine

螺卷毛殼Chaetomium│cochliodes 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR狀瘤病抗體試劑盒秦皮乙;Esculetin

乳乳球菌乳亞種Lactococcus│lactis subsp. lactis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品狀瘤病18型衣殼蛋白L1試劑盒秦皮;Fraxetin
細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒T7 tag(recombinant T7-tagged proteins)  T7 tag標(biāo)簽抗原規(guī)格： 0.5mg

V5 tag(recombinant V5-tagged protein)  V5 tag多肽抗原規(guī)格： 0.5mg

KT3 tag  KT3 tag標(biāo)簽抗原規(guī)格： 0.5mg

VSV-G tag(vesicular stomatitis virus glycoprotein)  VSV-G tag標(biāo)簽抗原規(guī)格： 0.5mg

HLA-DR(human leukoyte Antigen DR)  HLA-DR抗原規(guī)格： 0.5mg