商品介紹:
測(cè)定意義:ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP含量并且計(jì)算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。測(cè)定原理:肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測(cè)磷酸肌酸含量,以此反應(yīng)ATP含量。 |
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | ATP含量測(cè)試盒50管/24樣 |
檢測(cè)方法 | 可見(jiàn)分光光度法 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50管/24樣 |
產(chǎn)品貨號(hào) | AS6321126 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
維A;(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Catharanthine sulfate多巴受體D2抗體包裝5g
維E煙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Catharanthine sulfate多巴受體D1抗體包裝100ml
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Combretastatin A4 多巴受體相互作用蛋白1抗體包裝25ml
維生A醋酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Oxytetracycline凋亡相關(guān)蛋白激1抗體包裝5ml
維生B1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Oxytetracycline凋亡相關(guān)蛋白激2抗體包裝1g
維生B12(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Chrysin多巴、cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體包裝500mg
維生B3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Chrysin磷化多巴/cAMP調(diào)節(jié)神經(jīng)磷蛋白抗體包裝100g
維生B6(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Formononetin磷化多巴/cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體包裝25g
維生C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Formononetin磷化雙皮質(zhì)抗體包裝25g
維生C鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Daidzein磷化Disabled 1抗體包裝5g
維生K3,萘醌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Daidzein磷化Disabled 1抗體包裝1g
萎銹靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D(-)-allo-Threonine磷化Disabled 1抗體包裝5g
肟菌酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Deoxycorticosterone acetate 雙皮質(zhì)抗體包裝25g
烏地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Deoxycorticosterone acetate D酪激衰減蛋白2抗體包裝5g
烏地爾雜質(zhì)A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tetrahydro-L-Biopterin (dihydrochloride)磷化D酪激衰減蛋白2抗體包裝25g
: F298資源名稱: 生香毛霉 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR維生B1試劑盒L-色 ; L-Tryptophan
芽胞桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品維生A試劑盒石斛堿;Dendrobine
曲霉Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng) 微管相關(guān)蛋白tau試劑盒麝香草; Thymol
ATP含量測(cè)試盒50管/24樣嗜熱鏈球 乙?;阴?duì)苯同種異體移植炎癥因子1Elisa
Ramlibacter tataouinensis 4'--4-氨基二苯轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體1Elisa
產(chǎn)氮假單胞(可定) 單氟磷酸鈉聚(ADP核糖)聚合1Elisa
莫哈韋芽孢桿 基磺酰乙型肝炎病表面IgG抗體Elisa
變綠肉座 [1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基][2-[[(4-基)亞氨基]甲基]-4白介28DElisa
少孢酵母 2--4-氟苯白喉IgG抗體Elisa
盤多毛孢 萘酯電壓門控通道抗體Elisa
短小克銀漢霉 -5-甲酸甲酯7-脫氫膽固Elisa
釀酒酵母 2-(1-哌基)瘤病16型E6蛋白Elisa
雞傷寒沙門氏 2-羥基苯并噻唑Elisa
黑曲霉 DL-2-(3-苯氧基)酸/調(diào)果酸血紅氧合1Elisa
球孢白僵 O-去甲游離型肝炎病核心抗原Elisa
釀酒酵母 2--1,4-萘醌白介8受體αElisa
微桿屬 丁酸-1,1-二甲基-2-苯乙酯白介8受體βElisa
產(chǎn)堿假單胞 4-溴-1H-吡咯-2-羧酸甲酯膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Elisa
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。