雙縮脲總蛋白試劑公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：Bacillus circulans人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
Bacillus circulans人L苯解氨酶
Bacillus circulans人5核苷酸酶
Bacillus circulans人1,3-βD葡葡糖苷酶
Bacillus clarkii人肌酸激酶
Bacillus clausii人靶向核糖核酸酶
Bacillus coagulans

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類(lèi)：蛋白檢測(cè)

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：專(zhuān)門(mén)用于雙縮脲法蛋白定量,通過(guò)1、 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)進(jìn)行蛋白的精確定量分析

注意事項(xiàng)：主要由硫酸銅、酒石酸鈉、碘hua鉀等組成。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

釀酒酵母周期蛋白SG2N抗體Anti-GAA Antibody心肌型蘭定受體2(RYR2)

考克氏菌STRN4蛋白抗體Anti-GAB1 Antibody心肌(MYOCD)

鉤狀木霉鈉離子通道蛋白7α/Na+ CP type VIIα抗體Anti-GABRA1 Antibody心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)

平滑假絲酵母電壓門(mén)控鈉通道SCN3α蛋白/Na+ CP type IIIα抗體Anti-GABBR1 Antibody心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)

乳白耙菌神經(jīng)元電壓門(mén)控鈉通道蛋白β2/Na+ CP type IIβ抗體Anti-GAD1 Antibody心肌肌動(dòng)蛋白α1(ACTC1)

金頂側(cè)耳紅膜蛋白STOM抗體Anti-GABRB3 Antibody心肌鈣黏蛋白(CDHH)

短小芽孢桿菌鈉依賴性脯轉(zhuǎn)運(yùn)PROT抗體Anti-GAD1 Antibody斜方蛋白1(RHOM1)

釀酒酵母基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體Anti-GAD2 Antibody小異二聚體伴侶(SHP)

紫丁香蘑溶質(zhì)載體蛋白家族35成員C2抗體Anti-GAD2 Antibody小亞基鈣蛋白1(CAPNS1)

中國(guó)臺(tái)灣根霉轉(zhuǎn)綠激活蛋白SRCAP抗體Anti-GADD45A Antibody小蛋白γ(PARVγ)

放射形根瘤菌上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體Anti-GAD2 Antibody小蛋白β(PARVβ)

污黑腐皮殼纖溶原激活物抑制因子2/血漿原激活抑制因子-2抗體Anti-GADD45A Antibody小蛋白α(PARVα)

華麗側(cè)耳 (佛羅里達(dá)側(cè)耳)SLFNL1抗體Anti-GADD45G Antibody小腦肽4(CBLN4)

鏈球菌(不定種)SCN2A抗體Anti-Galactosidase alpha/Gla Antibody小腦肽3(CBLN3)

側(cè)耳SEL1L抗體Anti-GAL Antibody小腦肽2(CBLN2)

巴博乳桿菌SCN1A抗體Anti-Galectin 2/LGALS2 Antibody小腦肽1(CBLN1)

鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白8抗體膠質(zhì)芽胞桿菌人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞

組蛋白甲基轉(zhuǎn)移SMYD4抗體煙草節(jié)桿菌人滑膜細(xì)胞

絲/蘇蛋白激38抗體毛頭鬼傘（雞腿菇）人骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞

分選連接蛋白1抗體離褶傘（松毛菇）人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞
雙縮脲總蛋白試劑細(xì)胞培養(yǎng)污染性支原體M.arginini鑒定16S rDNA20次人胚肺成纖維；HFL1小鼠催產(chǎn)（OT）ELISA試劑盒,

PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒人胚腎；293 [HEK-293]小鼠抑瘤M（OSM）ELISA試劑盒,

細(xì)胞培養(yǎng)污染性支原體A.laidlawii鑒定16S rDNA20次人羊膜；HA小鼠中性粒彈性蛋白酶（NE）ELISA試劑盒,

PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒人胚肺成纖維；HFL-I小鼠抗受體（ATR）ELISA試劑盒,

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。