詳細介紹
產(chǎn)品分類:細胞其他
儲存條件:4℃,12個月
用途:又稱KREBS-RINGER BICARBONATE BUFFER。不含碳酸氫鈉。作用類似于Ringer液,用于動物離體實驗,肌體灌流、清洗組織,并維持離體組織的正常生理功能。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
Krebs-Ringer粉劑 | 1L | FS-R6604 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
5-羥色鹽鹽(標準品) Potassium bicarbonate轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體包裝500g
6'''-阿魏酰斯皮諾 Sodium dodecanesulfonate內(nèi)皮受體蛋白酪激抗體包裝250mg
6''-O-二酰基染料木苷 Theophylline酪蛋白激受體B2抗體包裝1g
6''-二沙苑子苷單酯 Cellulase磷化雌激受體ER alpha 抗體包裝5g
6'-O-β-D-葡萄糖基龍膽苦苷 Chondroitin sulfate重組增強型綠色熒光蛋白抗體包裝25ml
6'-O-β-D-芹糖獐芽菜苷 Isonicotinic acid雌激受體α抗體(用于western blot)包裝5ml
6,7,4'-三羥基異黃 L-Malic acid雌激受體α/β抗體包裝25g
6-氧基二氫血根堿 Proteinase K Solution, 20 mg/ml自分泌運動因子抗體包裝5g
6-氧基山柰-3-O-蕓香糖苷 Poly-L-lysine solution ( 0.1%)酪蛋白激A3受體抗體包裝100ml
6-姜(姜辣) Tetracycline hydrochloride solution, 50 mg/ml, sterileEHM2蛋白抗體包裝1g
6-姜烯(標準品) D-Glucose-6-phosphate, disodium, dihydrate磷化真核翻譯起始因子4E抗體包裝1g
6-羥基(標準品) Sodium succinate翻譯延伸因子EF-1a抗體包裝5g
6-基異麥冬黃烷A(標準品) Hemoglobin磷化雌激受體α抗體包裝1g
7,4'-二羥基黃(標準品) PEG 10000磷化表皮生長因子受體抗體包裝1g
7,8-二氫生物蝶呤 DL-Malic acid磷化絲裂原活化蛋白激1抗體包裝5g
JCM3170=ATCC27875=CBS420.74=CECT3304=DSM4資源名稱: 披發(fā)糖多孢菌披發(fā)亞種 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品髓性核分化抗原試劑盒肉豆蔻;Myristicin
瓦克青霉Penicillium│waksmanii 質(zhì)量規(guī)格:純度大于99%,R構(gòu)型髓系觸發(fā)受體-1試劑盒忍冬苷;Lonicerin
ATCCBAA-482=CCM7143=CIP106688=DSM15638=NC資源名稱: 低溫乳桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體試劑盒日蟾蜍他靈;Gamabufotalin
Krebs-Ringer粉劑SPHK2/FITC 熒光標記鞘氨激2IgG
Spindlin 1/SPIN-2/FITC 熒光標記Spindlin 1/SPIN-2 腫瘤形成相關(guān)因IgG
SPY /FITC 熒光標記抗spindlyIgG
SRC /FITC 熒光標記整合樣金屬蛋白與凝血1型-7IgG
phospho-Src (Tyr418)/FITC 熒光標記化Src原癌因IgG
SREBP-1/FITC 熒光標記膽固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1IgG
SREBP-2/FITC 熒光標記膽固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2IgG
SRF/FITC 熒光標記血清應答因子IgG