堿性磷酸酶封閉液公司正在銷售的產(chǎn)品：人載脂蛋白F(ApoF)試劑盒 Anti-MAP2K6 Antibody風(fēng)疹胞病 IgM(捕獲法二步法)
人載脂蛋白H(ApoH)試劑盒 Anti-MAP3K10 Antibody弓形蟲(chóng)抗體 IgG(間接法二步法)
人載脂蛋白M(ApoM)試劑盒 Anti-MAP3K13 Antibody弓形蟲(chóng)抗體 IgM(間接法二步法)
人載脂蛋白A5(ApoA5)試劑盒

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：免疫組化

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：免疫組織化學(xué)染色中內(nèi)源性堿性磷酸酶封閉液,也稱滅活液。

注意事項(xiàng)：主要由左旋咪唑/鹽酸噻咪唑組成?？梢耘c顯影液混合使用。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

球孢白僵菌成纖維生長(zhǎng)因子受體1原癌基因伴侶蛋白抗體Human ZKSCAN1 ELISA Kit雞抗凝血Ⅲ(AT-Ⅲ)抗體免疫試劑盒

QT6 鈣粘蛋白家族成員7抗體Human ZC3HC1 ELISA Kit雞抗鏈球菌溶血O(ASO)抗體(IgM)免疫試劑盒

香菇Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體Human ZCCHC11 ELISA Kit雞抗鏈球菌溶血O(ASO)抗體(IgG)免疫試劑盒

磚紅鐮刀菌細(xì)絲蛋白A抗體Human ZFP36L2 ELISA Kit雞抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒

馬賽菌磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZFP64 ELISA Kit雞巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)免疫試劑盒

科羅多擬無(wú)枝菌磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZNF703 ELISA Kit雞窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒

粟酒裂殖酵母DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體Human MCPIP(Monocyte Chemoattractant Protein-induced Protein 1) ELISA Kit雞降鈣(CT)免疫試劑盒

長(zhǎng)根小德蘑鱗柄變種磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZNF711 ELISA Kit雞堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌磷化磷神經(jīng)膜抗體Human ZNF597 ELISA Kit雞甲狀腺(T4)免疫試劑盒

釀酒酵母磷化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體Human ZNF71 ELISA Kit雞甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒

德?tīng)柌加墟呓湍噶谆咨窠?jīng)膜抗體Human ZNF486 ELISA Kit雞低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒

釀酒酵母叉頭蛋白N1抗體Human ZNF600 ELISA Kit雞激敏感性脂肪(HSL)免疫試劑盒

腐殖質(zhì)鏈霉菌磷化DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體Human ZNF488 ELISA Kit雞基質(zhì)金屬蛋白2(MMP-2)免疫試劑盒

絲衣霉菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體Human ZNF496 ELISA Kit雞基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)免疫試劑盒

澳型核果褐腐病菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白8抗體Human ZFP36L1 ELISA Kit雞肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒

阿克蘇海洋桿菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白3B抗體Human TMPRSS4(Transmembrane protease serine 4) ELISA Kit雞肌動(dòng)蛋白,質(zhì)1(ACTB)免疫試劑盒

馬腺疫鏈球菌獸疫亞種Streptococcus│equi subsp.zooepidemicus 質(zhì)量規(guī)格：1000µg/mL,基體：10%HCl11-羥基柳杉

黃綠蜜環(huán)菌Armillaria│mellea 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體：0.1mol/LNaOH3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24

: CMCC44102資源名稱: 大腸埃希氏菌(大腸桿菌) 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml林澤蘭內(nèi)酯C
堿性磷酸酶封閉液(EGFR)ELISA Kit  大鼠表皮生長(zhǎng)因子受體規(guī)格： 48T

(IL-2sR)ELISA Kit  大鼠白介su2可溶性受體規(guī)格： 48T

(Ntn1)ELISA Kit  大鼠軸突生長(zhǎng)誘向因子1規(guī)格： 48T

(LDH)ELISA Kit  大鼠乳suan脫氫mei規(guī)格： 48T

(MAG Ab)ELISA Kit  大鼠抗髓鞘相關(guān)糖蛋白規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。