詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
異硫氰酸胍溶液 | 100ml | FS-R7356 |
產(chǎn)品分類:核酸提取
儲存條件:室溫,12個(gè)月
用途:蛋白質(zhì)變性,提取RNA
注意事項(xiàng):主要由異硫氰酸胍、DEPC處理水組成。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
赭鱗蘑菇溶菌抗體Human PEX7 ELISA Kit維生A(VA)
產(chǎn)氣腸桿菌蚓激抗體Human TNMD(Tenomodulin) ELISA Kit微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)
簇生黃韌傘瘦抗體Human PFDN4 ELISA Kit微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)
粉紅單端孢瘦受體抗體Human PFDN5 ELISA Kit微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B(MAP1LC3B)
灰樹花瘦受體抗體(長)Human PFKFB2 ELISA Kit微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3A(MAP1LC3A)
大腸埃希氏桿菌晚期包膜蛋白1抗體Human PGAP1(Post-GPI attachment to proteins factor 1) ELISA Kit微管微絲交聯(lián)因子1(MACF1)
華麗側(cè)耳(佛羅里達(dá)側(cè)耳)富含亮樣性核蛋白抗體Human PFKFB3 ELISA Kit微管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(ABCC3)
蘑菇晚期包膜蛋白2B抗體Human PEX5 ELISA Kit微管多特異性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(ABCC2)
紅冬孢酵母脂肪家庭成員K抗體Human PEX5L ELISA Kit網(wǎng)膜(omentin)
寇氏隱甲藻白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體Human PFTK1 ELISA Kit晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)
三葉草根瘤菌無腦回的致病基因LIS1抗體Human PEX7 ELISA Kit晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE/AGER)
大腸埃希氏菌溶體相關(guān)膜蛋白3抗體Human PFDN1 ELISA Kit晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)
靈芝亮腦啡肽抗體Human PFDN4 ELISA Kit外顯肽(extein)
腸膜明串珠菌自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體Human TNMD(Tenomodulin) ELISA Kit蛙皮(BBS)
假單胞菌指甲髕骨綜合征相關(guān)蛋白NPS1抗體Human PFDN5 ELISA Kit唾液(SA)
易脆毛霉自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈β3抗體Human PES1 ELISA Kit唾液過氧化物(SP)
JCM13563資源名稱: 棲污泥鹽土生古菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)常春藤皂苷B
蚜蟲擬酵母Pseudozyma│aphidis 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)竹節(jié)香附A
海底嗜冷桿菌Psychrobacter│submarinus 質(zhì)量規(guī)格:用于配位滴定銅時(shí)的指示劑五加苷E
異硫氰酸胍溶液MECF(ouse eosinophil chemotactic factor) ELISA Kit 小鼠嗜suan粒細(xì)胞趨化因子規(guī)格: 48T
Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 小鼠嗜suan粒細(xì)胞趨化蛋白規(guī)格: 48T
E-Selectin/CD62E(Mouse E-Selectin) ELISA kit 小鼠E選擇su規(guī)格: 48T
FAS/CD95(Mouse Factor-related Apoptosis) ELISA Kit 小鼠凋亡相關(guān)因子規(guī)格: 48T
Mouse Slit2 ELISA Kit 小鼠Slit2規(guī)格: 48T
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。