詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應,售后完善。
產(chǎn)品名稱 | ATP結(jié)合蛋白家族7抗體 |
英文名稱 | ABCB7 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
8異前列腺素8-iso-PG英文名稱:Mouse 8-iso prostaglandin, 8-iso-PG
血管內(nèi)皮細胞生長因子VEGF英文名稱:Mouse Vascular Endothelial cell Growth Factor, VEGF
血漿α顆粒膜蛋白GMP-140英文名稱:Mouse alpha-granular membrane protein, GMP-140
髓過氧化物酶MPO英文名稱:Mouse myeloperoxidase, MPO
顆粒酶BGzms-B英文名稱:Mouse granzymes B, Gzms-B
顆粒酶AGzms-A英文名稱:Mouse granzymes A, Gzms-A
補體蛋白4C4英文名稱:Mouse Complement 4, C4
腎素Renin英文名稱:Mouse Renin
α2抗纖溶酶α2-AP英文名稱:Mouse α2-Antiplasmin, α2-AP
α2纖溶酶抑制物α2-PI英文名稱:Mouse α2-plasmin inhititor, α2-PI
泛素蛋白Ub英文名稱:Mouse Ubiquitin, Ub
αL艾杜糖苷酸酶IDUA英文名稱:Mouse α-L-iduronidase, IDUA
αN已酰氨基葡糖苷酶αNAG英文名稱:Mouse αN-acetylglucosaminidase, αNAG
α甘露糖苷酶α Manase英文名稱:Mouse α mannosidase, α Manase
膜聯(lián)蛋白ⅤANX-Ⅴ英文名稱:Mouse annexin Ⅴ, ANX-Ⅴ
ATP結(jié)合蛋白家族7抗體Aspergillus sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 抗癌活性培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥
Peurotus ostreatus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 食用菌培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
Pseudonocardia sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性培養(yǎng)基: 0012生長條件: 56℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
Saccharomyces sp.分離基物: 土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 436生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
Micromonospora sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 活性物質(zhì);抗銅綠假單孢菌培養(yǎng)基: CM0038生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)
Pichia sp.分離基物: 小黃赤蜻體內(nèi)提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: YM 培養(yǎng)基:酵母提取物,3.0 g 麥芽提取物,3.0 g 葡萄糖,10.0 g 蛋白棟,5.0 g 瓊脂,20.0 g 蒸餾水1000 ml ,pH 6.2 +/- 0.2生長條件: 25℃,好氧存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Eurotium amsodami提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0015生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Vibrio parahaemolyticus提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0130生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
明亮發(fā)光桿菌種屬: Photobacterium phosphoreum提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0268生長條件: 20-25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法