詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學(xué)實驗、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 活化轉(zhuǎn)錄因子5抗體 |
英文名稱 | ATF5 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
補體蛋白3C3英文名稱:Mouse Complement 3, C3
疊氮胸苷AZT英文名稱:Mouse Azidothymidine, AZT
多巴胺DA英文名稱:Mouse dopamine, DA
高靈敏度促甲狀腺激素U-TSH英文名稱:Mouse ultrasensitive thyroid-stimulating hormone, U-TSH
高敏甲狀腺素u-T4英文名稱:Mouse Ultrasensitivity Thyroxine, u-T4
β葡萄糖醛酸苷酶βGD英文名稱:Mouse β-glucuronidase, βGD
谷氨酸脫羧酶自身抗體GAD-Ab英文名稱:Mouse glutamic acid decarboxylase autoantibody, GAD-Ab
雌二醇受體ER英文名稱:Mouse Estradiol receptor, ER
半乳糖6硫酸酯酶Gal-6S英文名稱:Mouse galactose-6-sulphate sulphatase, Gal-6S
甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白PTHrP英文名稱:Mouse Parathyroid Hormone Related Protein, PTHrP
苯丙氨酸LPA英文名稱:Mouse L-phenylalanine, LPA
抗心磷脂抗體IgAACA-IgA英文名稱:Mouse anti-cardiolipin antibody IgA, ACA-IgA
抗心磷脂抗體IgMACA-IgM英文名稱:Mouse anti-cardiolipin antibody IgM, ACA-IgM
抗心磷脂抗體IgGACA-IgG英文名稱:Mouse anti-cardiolipin antibody IgG, ACA-IgG
apelin 12AP12英文名稱:Mouse apelin 12, AP12
活化轉(zhuǎn)錄因子5抗體浸麻類芽胞桿菌種屬: Paenibacillus macerans提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)丙酮、乙醇培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;礦物油法;定期移植法
Serratia marcescens提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: L-天門冬酰胺酶(較高)培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Bacillus licheniformis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 蛋白酶培養(yǎng)基: 0002生長條件: 37℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Gomphidius viscidus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 食用菌培養(yǎng)基: 0017生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Halomonas axialensis分離基物: 硫化物/TVG硫化物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 潛在的潛在的有機污染物降解菌/分離自多環(huán)芳烴降解菌群培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Lysinibacillus xylanilyticus分離基物: 生物樣/海灘藻提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 共生微生物/藻類共生菌培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Saccharomyces cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀造醬油培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Glomerla cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk分離基物: 紫薇葉片提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 植物病原物,用于種群的遺傳學(xué)研究和炭疽病害的診斷和防治培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Marinobacter lipolyticus分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1.海洋石油污染生物修復(fù); 2.生物活性物質(zhì)篩選培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法