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綿羊泛素蛋白

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：染色其他

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：主要用于染色體染色如體細(xì)胞染色體和減數(shù)分裂染色。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

釀酒酵母熱休克蛋白J2抗體Human AHR(Aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit人β4整合(ITG β4/CD104)免疫試劑盒

異常漢遜酵母雙特異性酪磷化調(diào)節(jié)激1B抗體Human RHOT1 (Mitochondrial Rho GTPase 1) ELISA KIT人β2轉(zhuǎn)鐵蛋白(β2TF)免疫試劑盒

地中海中慢生根瘤菌*二?；视图?抗體Human RD3 (Protein RD3) ELISA KIT人β2整合(ITG β2/CD11+CD18)免疫試劑盒

慢生根瘤菌DNA依賴蛋白激催化亞基抗體Human RRAD (GTP-binding protein RAD) ELISA KIT人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)免疫試劑盒

青黃褐硬皮馬勃雙同源框蛋白4抗體Human RCCD1 (RCC1 domain-containing protein 1) ELISA KIT人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)免疫試劑盒

釀酒酵母無(wú)精癥缺失基因1抗體Human RASAL1 (RasGAP-activating-like protein 1) ELISA KIT人β2糖蛋白(β2-GP)免疫試劑盒

膠孢磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體Human ANKRD19P (Putative ankyrin repeat domain-containing protein 19) ELISA KIT人β1腎上腺能受體(β1AR)抗體免疫試劑盒

多主葡萄殼菌通道蛋白DRK1抗體Human RCSD1 (CapZ-interacting protein) ELISA KIT人β1,4-N-乙酰基半乳糖轉(zhuǎn)移2(B4GALNT2)免疫試劑盒

蜜蜂生球擬酵母GTP發(fā)育調(diào)控結(jié)合蛋白1抗體Human RCE1 (CAAX prenyl protease 2) ELISA KIT人β,β胡蘿卜9',10'加氧(BCO2)免疫試劑盒

米川黃桿菌骨架4.1蛋白家族DAL1抗體Human RALGPS1 (Ras-specific guanine nucleotide-releasing factor RalGPS1) ELISA KIT人α-烯化(ENO1/ENO1L1/MBPB1/MPB1)免疫試劑盒

平滑假絲酵母DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激2抗體Human REPS1 (RalBP1-associated Eps domain-containing protein 1) ELISA KIT人α戊二脫氫(α-KGDHC)免疫試劑盒

慢生根瘤菌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能磷蛋白DAB2抗體Human RFXANK (DNA-binding protein RFXANK) ELISA KIT人α乳清蛋白(α-La)免疫試劑盒

黃赭色鏈霉菌命運(yùn)決定因子DACH1抗體Human RBCK1 (RanBP-type and C3HC4-type zinc finger-containing protein 1) ELISA KIT人α葡萄糖苷(α-glucosidase)免疫試劑盒

米根霉Dab2相互作用蛋白抗體Human RSC1A1 (Regulatory solute carrier protein family 1 member 1) ELISA KIT人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)免疫試劑盒

食砜節(jié)桿菌線粒體2,4-雙烯酰還原1抗體Human RAP1GAP2 (Rap1 GTPase-activating protein 2) ELISA KIT人α-內(nèi)肽(α-EP)免疫試劑盒

大腸桿菌動(dòng)力蛋白激活蛋白亞基3抗體Human RXFP2 (Relaxin receptor 2) ELISA KIT人α肌動(dòng)蛋白(α Actin)免疫試劑盒

膠孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格：100µg/mL,基體: 1%HCl芹菜苷

鏈霉菌（吸類群）Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：濃度范圍:0.959-1.01(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品7-乙基-10羥基

球形芽孢桿菌Bacillus│sphaericus 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml葒草-2"-0-B-L半乳糖苷
硫堇染色液pFN(Human Plasma fibronectin) ELISA kit  人血漿纖維連接蛋白規(guī)格： 48T

cFn(Human cellular fibronectin) ELISA kit  人細(xì)胞纖維連接蛋白規(guī)格： 48T

TPS(Human Total protein S) ELISA Kit  人總蛋白S規(guī)格： 48T

SDPR(human serum deprivation response) ELISA Kit  人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白規(guī)格： 48T

HNP1-3(Human neutrophil peptide 1-3) ELISA Kit  人中性粒細(xì)胞防御su1-3規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。