詳細(xì)介紹
產(chǎn)品分類:酶類染色
儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月
用途:過氧化物酶酶染色
注意事項(xiàng):ICSH推薦方法。主要由聯(lián)苯胺等組成,染色液需臨用前配置,且不宜久置。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
過氧化物酶染色液 | 4×10ml | FS-R6776 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
地瓜藤(標(biāo)準(zhǔn)品) Eupalinolide B整合α5抗體Integrin α5包裝25g
地黃(生地黃)(標(biāo)準(zhǔn)品) Vinorelbine整合β1/Integrin β1抗體包裝5g
地錦草(斑地錦)(標(biāo)準(zhǔn)品) Vinorelbine tartrate整合αVβ3抗體包裝100g
地錦草(標(biāo)準(zhǔn)品) Nifura胰島樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體包裝25g
地龍(參環(huán)毛蚓)(標(biāo)準(zhǔn)品) Nifura型流感病血凝抗體包裝5g
地稔(標(biāo)準(zhǔn)品) Hydroxytyrosol型流感病血凝抗體包裝25g
地蜈蚣(標(biāo)準(zhǔn)品) 4',5,7-Trihydroxy-3',6-dimethoxyflavone整合αVβ5抗體包裝5g
地榆(地榆)(標(biāo)準(zhǔn)品) Tiliroside干擾調(diào)節(jié)因子1抗體包裝1g
地榆皂苷II(標(biāo)準(zhǔn)品) 4',5-Dihydroxy-7-methoxyflavone白介6包裝25g
地榆皂苷I(標(biāo)準(zhǔn)品) Khasianineγ干擾誘導(dǎo)蛋白16抗體包裝5g
滇藏五味子G Ligustroflavone整合αVβ1抗體包裝1g
滇桂艾納香(標(biāo)準(zhǔn)品) Schaftoside白介-20抗體包裝5g
滇雞血藤(標(biāo)準(zhǔn)品) 9,10-Dimethoxy-2,3-(methylenedioxy)-13,13a-didehydrob干擾相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)因子2抗體包裝1g
滇(標(biāo)準(zhǔn)品) Tangeretin白介-1受體相關(guān)激2抗體包裝5g
化木蘭花堿 Tangeretin磷化胰島受體β抗體包裝25g
舟形毛殼Chaetomium│cymbiforme 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品柯薩奇病腺病受體試劑盒黃芪苷;Astragaloside I
需鹽色鹽桿菌Chromohalobacter│salexigens 質(zhì)量規(guī)格:>99%,醫(yī)藥級柯薩奇病IgE試劑盒虎杖苷;Polydatin
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR柯薩奇病IgA試劑盒槲皮苷;Quercitrin
過氧化物酶染色液IL-14(human) 人白介su-14規(guī)格: 96T
IL-15 人白介su-15規(guī)格: 48T
IL-16 人白介su-16規(guī)格: 48T
IL-17 人白介su-17規(guī)格: 48T
IL-18 人白介su-18規(guī)格: 48T