天青A-伊紅染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：綿羊補(bǔ)體成分3a(C3a)試劑盒 Anti-EEF1B2 Antibody磷酸化Smad2抗原
綿羊水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒 Anti-EEF2K AntibodySmad4抗原
綿羊破骨相關(guān)受體(OSCAR)試劑盒Anti-EFEMP1 AntibodySmad 7(多肽)
綿羊IV型膠原(COL4)試劑盒Anti-EEF2K Antibody磷酸化

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：核酸染色

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,6個(gè)月

用途：漿細(xì)胞核深藍(lán)色，胞質(zhì)灰藍(lán)色。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

熱葡糖苷地芽孢桿菌胱抑C/半胱蛋白抑制劑C抗體Human VASP(Vasodilator-stimulated phosphoprotein) ELISA Kit人抗中性粒核周抗體(pANCA)免疫試劑盒

釀酒酵母C-藻藍(lán)/藻藍(lán)蛋白/藻青蛋白抗體Human TRIM3(Tripartite motif-containing protein 3) ELISA Kit人抗中性粒胞漿抗體(cANCA)IgM 免疫試劑盒

印度芽孢桿菌色P450 1A1抗體Human (DNA topoisomerase 1) ELISA Kit人抗中性粒/中心體抗體(ACA)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌絲/蘇蛋白質(zhì)激II α抗體Human PTPRF(Receptor-type tyrosine-protein phosphatase F) ELISA Kit人抗增殖核抗原(PCNA)抗體免疫試劑盒

棘孢木霉2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框66抗體Human AFM(Afamin) ELISA Kit人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)免疫試劑盒

外皮毛霉CULLIN抗體Human ASS1(Argininosuccinate synthase) ELISA Kit人抗抑制B抗體(IgG)免疫試劑盒

釀酒酵母小牛胸腺DNA抗體Human RHOA(Transforming protein RhoA) ELISA Kit人抗異質(zhì)型核糖核蛋白抗體/抗RA33抗體(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)免疫試劑盒

阿爾通山堿線菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框226抗體Human ADC(Arginine decarboxylase) ELISA Kit人抗異亮酰tRNA連接,質(zhì)(IARS)抗體免疫試劑盒

發(fā)根土壤桿菌組織蛋白L抗體Human NRTN(Neurturin) ELISA Kit人抗異亮tRNA連接,線粒體(IARS2)抗體免疫試劑盒

芽孢桿菌屬絲/蘇蛋白激II β抗體(casein kinase IIβ)Human AXIN2(Axin-2) ELISA Kit人抗胰島受體抗體(AIRA)免疫試劑盒

矩圓黑盤(pán)孢角蛋白18抗體Human VASP(Vasodilator-stimulated phosphoprotein) ELISA Kit人抗(AT)免疫試劑盒

假單胞菌轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1結(jié)合蛋白抗體Human PPP1CA(Serine/threonine-protein phosphatase PP1-alpha catalytic subunit) ELISA Kit人抗眼肌抗體(EMAb)免疫試劑盒

海水鹽單胞菌22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框45抗體Human TRIM3(Tripartite motif-containing protein 3) ELISA Kit人抗血小板抗體IgM(PA-IgM)免疫試劑盒

膜醭畢赤酵母22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框32抗體Human (DNA topoisomerase 1) ELISA Kit人抗血小板抗體IgG(PA-IgG)免疫試劑盒

卷枝毛霉CD5L抗體Human PTPRF(Receptor-type tyrosine-protein phosphatase F) ELISA Kit人抗血小板抗體IgA(PA-IgA)免疫試劑盒

釀酒酵母CD6抗體Human AFM(Afamin) ELISA Kit人抗血小板抗體(anti-PA Ab)免疫試劑盒(半定量)

多殺性巴氏桿菌Pasteurella│multocida 質(zhì)量規(guī)格：離子對(duì)色譜用試劑Ⅱ型前膠原羧基端肽試劑盒D-阿伯糖

肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格：離子對(duì)色譜用試劑Ⅱ型前膠原N端前肽試劑盒艾黃

小菌核屬菌種Sclerotium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：離子對(duì)色譜用試劑Ⅱ型膠原螺旋肽試劑盒阿魏鈉
天青A-伊紅染色液E1/UBAE(Human E1/ubiquitin-activating enzyme) ELISA Kit  人泛su激活mei規(guī)格： 48T

PP(Human Pepsin) ELISA Kit  人胃蛋白mei規(guī)格： 48T

HK(Human Hexokinase) ELISA Kit  人己糖激mei規(guī)格： 48T

PDH E1(Human pyruvate dehydrogenase-E1) ELISA Kit  人丙tongsuan脫氫meiE1規(guī)格： 48T

GSK(Human glycogen synthase kinase) ELISA Kit  人糖原合成mei激mei規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。