金蓮橙O指示劑公司正在銷售的產(chǎn)品：雞蛋白激酶C-ε(PKCε)試劑盒Anti-ZP2 AntibodyAlexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗水貂IgG
雞唾液酸(SA)試劑盒 BrdUAlexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗水貂IgG
雞L苯解氨酶(PAL)試劑盒 Anti-β-catenin AntibodyAlexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗水貂IgG
雞糖盞蛋白(GC)試劑盒Anti-

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產(chǎn)品分類：指示劑

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：?jiǎn)我凰釅A指示劑

注意事項(xiàng)：又稱間苯二酚磺,金蓮橙O變色范圍：11.0-13.0,顏色由黃綠變?yōu)槊倒迳?/span>

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

根瘤菌磷化受體酪激c-Abl抗體Human MANSC1 ELISA Kit小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒

芹側(cè)耳（杏鮑菇）β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體（X11α）Human MAP4K1(MEK Kinase Kinase 1) ELISA Kit小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)免疫試劑盒

海神魯杰氏菌載脂蛋白E抗體Human MAGEC3 ELISA Kit小鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)免疫試劑盒

芽孢桿菌屬甲胎蛋白AFP抗體Human MAK ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體4(TRAIL-R4)免疫試劑盒

類銀白紫絲膜菌陰離子交換蛋白2抗體Human MAP4K2 ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3(TRAIL-R3)免疫試劑盒

釀酒酵母鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human MAGED2 ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)免疫試劑盒

球孢白僵菌三磷腺苷家族蛋白3A抗體Human MAGED1( MAGE family member D1) ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)免疫試劑盒

Pseudomonas plecoglossicida  載脂蛋白J抗體Human MAGEF1 ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員11A(TNFRSF11A/RANK)免疫試劑盒

海棗曲霉載脂蛋白H抗體Human MAGED4 ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子配體相關(guān)分子-1(TL1)免疫試劑盒

棲植物潘亞堿湖桿菌二磷腺苷核糖基轉(zhuǎn)移4抗體Human MAGEH1 ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)免疫試劑盒

馬褂木炭疽盤孢菌AKIRIN2蛋白抗體Human MBD2 ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)免疫試劑盒

阿姆斯特丹曲霉ADP核糖基化樣因子8B抗體Human MC3R(Melanocortin receptor 3) ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)免疫試劑盒

蒙氏假單胞菌三磷腺苷家族蛋白2抗體Human MBD3(Methyl-CpG-binding domain protein 3) ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體免疫試劑盒

糙皮側(cè)耳AKIRIN1蛋白抗體Human MBD4 ELISA Kit小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒

暗產(chǎn)色鏈霉菌錨定蛋白樣蛋白1抗體Human MARK4 ELISA Kit小鼠腫瘤標(biāo)志物(CA724)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌腺苷激2抗體Human MBD5(Methyl-CpG-binding domain protein 5) ELISA Kit小鼠中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)免疫試劑盒

結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR表皮生長(zhǎng)因子受體試劑盒鹽白屈菜紅堿

芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學(xué)級(jí)表皮生長(zhǎng)因子試劑盒銀杏

蠟狀芽孢桿菌Bacillus cereus 質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級(jí)表睪野菊花內(nèi)酯
金蓮橙O指示劑CK-19(Human cytokeratin 19) ELISA Kit  人細(xì)胞角蛋白19規(guī)格： 48T

CK-18(Human cytokeratin 18) ELISA Kit  人細(xì)胞角蛋白18規(guī)格： 48T

CgA(Human Chromogranin) ELISA Kit  人嗜鉻蛋白A規(guī)格： 48T

pRB(Human retinoblastoma tumor suppressor protein) ELISA Kit  人shi網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白規(guī)格： 48T

MPF(Human maturation promoting factor) ELISA Kit  人成熟促進(jìn)因子規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。