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輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒100管/48樣

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更新時間:2022-06-09 16:11:51瀏覽次數(shù):246

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/48樣
貨號 AS63211 應用領域 化工
主要用途 僅供科研 檢測方法 微量法
輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒100管/48樣的相關產(chǎn)品:NAD激酶(NADK)測試盒100管/48樣輔酶Ⅱ系列NAD激酶(NADK)測試盒50管/24樣輔酶Ⅱ系列NADP磷酸酶(NADPase)測試盒100管/96樣輔酶Ⅱ系列NADP磷酸酶(NADPase)測試盒50管/48樣輔酶Ⅱ系列6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒100管/96樣輔酶Ⅱ系列

詳細介紹

公司產(chǎn)品僅供科研使用:

產(chǎn)品名稱檢測方法規(guī)格貨號
輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒100管/48樣微量法100管/48樣AS63211

商品介紹:

商品介紹

測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

常見樣本處理方法:

1、血清(漿)樣品:直接檢測。

2、細菌、細胞或組織樣品的制備: 細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液) ,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次)8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質量(g) :提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。


產(chǎn)品優(yōu)點如下:

1、快速簡便:雙試劑,直接操作,快速、簡便。

2、取樣量微:需要的樣本量是羥胺法的1/10。

3、靈敏度高:檢測線0.5U/ml,是羥胺法5倍,鄰苯三酚法的200倍

4、穩(wěn)定性好:批內CV=5.50%,批間CV=3.32%,試劑盒2~8℃存放3個月有效。

5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.2%。6、回收試驗: X =102.3%。7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復性強。且特異性強,不受類SOD物質的干擾8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。


測定步驟:

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣,不能加在管壁上

4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標本后和加結合物后,應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應疊在一起。

3.為避免蒸發(fā),板上應加蓋,或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后,反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟,但卻 是決定實驗成敗的關鍵。

2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標儀測定結果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。

乳酸脫氫酶(LDH)測試盒100管/48樣    輔酶Ⅰ系列

乳酸脫氫酶(LDH)測試盒50管/24樣    輔酶Ⅰ系列

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NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒50管/48樣    輔酶Ⅰ系列

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NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒50管/48樣    輔酶Ⅰ系列

線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測試盒100管/96樣    輔酶Ⅰ系列

線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測試盒25管/24樣    輔酶Ⅰ系列

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乙醇含量測試盒100管/96樣    輔酶Ⅰ系列

乙醇含量測試盒50管/48樣    輔酶Ⅰ系列

乙醇脫氫酶(ADH)測試盒100管/96樣    輔酶Ⅰ系列

乙醇脫氫酶(ADH)測試盒50管/48樣    輔酶Ⅰ系列

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輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒100管/48樣    輔酶Ⅱ系列

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實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。



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