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技術(shù)文章

大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒樣本收集步驟方法

閱讀:298          發(fā)布時(shí)間:2021-1-27

大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng):

1、操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,是否符合要求。

2、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。

3、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孔內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孔間竄流,造成孔問(wèn)污染,導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。

4、 進(jìn)口大鼠要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯(cuò)誤。

5、顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng),顯色液量不能過(guò)多,以免顯色過(guò)強(qiáng)。

6、試劑的影響因數(shù):應(yīng)選用有國(guó)家批準(zhǔn)文號(hào),質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品,不能圖便宜,忽視質(zhì)量保證。試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi),在使用時(shí)先平衡至室溫,不同批號(hào)的試劑組分不宜交叉使用。試劑開(kāi)啟后要在一周內(nèi)用完,剩余的試劑下次用時(shí)應(yīng)先檢查是否變質(zhì),,顯色劑如被污染變色將造成全部顯色,導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。過(guò)期的試劑不宜再用,若別無(wú)選擇,ELISA試劑盒進(jìn)口大鼠應(yīng)做好雙份質(zhì)控品的監(jiān)測(cè),確保結(jié)果的可靠性。

大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)本收集步驟: 

包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1、血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

2、血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3、尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4、細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5、組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

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