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一、細胞培養(yǎng)物上清液

1.將細胞培養(yǎng)上清移至離心管，4℃，1,500 rpm 離心 10 分鐘。

 2.立即進行上清液的分裝并于 -80℃ 保存。避免反復凍融。

 二、細胞提取物

1.將細胞培養(yǎng)板放置在冰上。

2.吸出培養(yǎng)基并用預冷 PBS 輕輕漂洗細胞一次。

3.棄去 PBS ，向 100 mm 培養(yǎng)板加入 0.5ml 提取緩沖液。

4.收集細胞，然后移至經(jīng)過預冷的離心管中。

5.短暫渦旋后冰上孵育 15-30 分鐘

6.4℃ 13,000  rpm 離心 10 分鐘，沉淀不溶性內(nèi)容物。

7.將上清（這里是指可溶性細胞提取物）分裝至預冷的離心管中，并于 -80℃ 保存。盡可能減少反復凍融次數(shù)。

三、條件培養(yǎng)基

1.將細胞接種到含*（含血清）生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中，使細胞增殖達到預期的融合度。

2.棄去培養(yǎng)基，用預溫 PBS 小心洗滌。重復洗滌步驟。

3.棄去 PBS 洗滌液并小心加入無血清培養(yǎng)基。

4.孵育 1-2 天。

5.將培養(yǎng)基移至離心管，4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘。

6.立即分裝上清并于 -80℃ 保存。避免反復凍融。

 

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