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核心提示：潔凈室（無菌室）是微生物檢測(cè)的重要場(chǎng)所與最基本的設(shè)施。它是微生物檢測(cè)質(zhì)量保證的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。因此它的設(shè)計(jì)要按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范》、國(guó)家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《藥 品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范（試行）》中第十八條規(guī)定執(zhí)行。微生物實(shí)驗(yàn)室潔凈室的施工、安裝、驗(yàn)收應(yīng)按國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《潔凈室的施工及驗(yàn)收規(guī)范》執(zhí)行。對(duì)于微生物檢測(cè)工作者和使用管理者來講，更大量的工作是進(jìn)行正常管理到日常的使用。潔凈室（無菌室）的標(biāo)準(zhǔn)要符合GMP潔凈度標(biāo)準(zhǔn)要求。

潔凈室（無菌室）的使用管理要做到以下工作：

1、潔凈室（無菌室）要符合規(guī)范要求：無菌室應(yīng)采光 良好、避免潮濕、遠(yuǎn)離廁所及污染區(qū)。面積一般不超過10m2，不小于5m2；高度不超過2.4m。由1—2個(gè)緩沖間、操作間組成（操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對(duì)），操作間和緩沖間之間應(yīng)具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等，不應(yīng)放置培養(yǎng)箱和其他雜物；無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形，無縫隙，不留死角。操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道。

無菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度100級(jí)或放置同等級(jí)別的超凈工作臺(tái)，室內(nèi)溫度控制18—26℃，相對(duì)濕度45%—65%。緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置能達(dá)到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級(jí)別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5Pa，潔凈室（區(qū)）與室外大氣的靜壓差大于10Pa。無菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板 內(nèi)，室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻，光照度不低于300lx。緩沖間和操作間所設(shè)置的紫外線殺菌燈（2—2.5w/m3），應(yīng)定期檢查輻射強(qiáng)度，要求在操作面上達(dá)40uw/m2。不符合要求的紫外殺菌燈應(yīng)及時(shí)更換。

2、建立使用登記制度

在登記冊(cè)中可設(shè)置以下項(xiàng)目?jī)?nèi)容：如使用日期、時(shí)間、使用人、設(shè)備運(yùn)行狀況、溫度、濕度、潔凈度狀態(tài)（沉降菌數(shù)、浮游菌數(shù)、塵埃粒子數(shù) ）、報(bào)修原因、報(bào)修結(jié)果、清潔工作（臺(tái)面、地面、墻面、天花板、傳遞窗、門把手）、消毒液名稱等。

3、建立使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOP）并嚴(yán)格管理:SOP內(nèi)容至少要有以下幾點(diǎn)：

（1）規(guī)定凈化系統(tǒng)使運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)間要求每次實(shí)驗(yàn)前應(yīng)開啟凈化系統(tǒng)使運(yùn)轉(zhuǎn)至少1h以上，同時(shí)開啟凈化臺(tái)和紫外燈。

（2）物品進(jìn)入潔凈室（無菌室）基本要求：凡進(jìn)入潔凈室（無菌室）的物 品必須先在第一緩沖間內(nèi)對(duì)外部表面用消毒劑消毒滅菌，再經(jīng)物流緩沖間、傳遞窗1h以上，及無菌空氣吹干后送入無菌室。注意帶纖維、易發(fā)塵物品不得帶進(jìn)凈化實(shí)驗(yàn)室。無菌室內(nèi)固定物品不得任意搬出。

（3）人員進(jìn)入潔凈室（無菌室）要求：實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入潔凈室（無菌室）不得化妝、帶手表、戒指等首飾；不得吃東西、嚼口香糖。應(yīng)清潔手后進(jìn)入第一緩沖間更衣，同時(shí)換上消毒隔離拖鞋，脫去外衣，用消毒液消毒雙手后戴上無菌手套，換上無菌連衣帽（不得讓頭發(fā)、衣等暴露在外面），戴上無菌口罩。然后，換或是再戴上第二副無菌手套，在進(jìn)入第二緩沖間時(shí)換第二雙消毒隔離拖鞋。再經(jīng)風(fēng)淋室30s風(fēng)淋后進(jìn)入無菌室。

（4）溫濕度觀察要求：觀察溫度計(jì)、濕度計(jì)上顯示的溫濕度是否在規(guī)定的范圍內(nèi)，并作為實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄在案。如發(fā)現(xiàn)問題應(yīng)及時(shí)尋找原因，及時(shí)報(bào)修和及時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室主管，并將報(bào)修原因和結(jié)果記錄歸檔。

（5）沉降菌落計(jì)數(shù)與浮游菌測(cè)定要求：在每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)，對(duì)操作室和層流臺(tái)做微生物沉降菌落計(jì)數(shù)，將結(jié)果記錄在使用登記本上，并作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原始數(shù)據(jù)記錄在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。每周1次，或在無菌檢查等必要時(shí)，在每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)對(duì)操作室和凈化臺(tái)進(jìn)行浮游菌測(cè)定，將結(jié)果記錄在使用登記本上，并作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原始數(shù)據(jù)記錄在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。

（6）消毒要求：無菌室每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液（常用消毒劑的品種有：5—20倍稀釋的碘伏水溶液、0.1%新潔爾滅溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（來蘇兒）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（處方：對(duì)羥基苯甲酸甲酯21.5g；對(duì)羥基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒劑品種與使用要進(jìn)行有效性驗(yàn)證方可使用，并定期更換消毒劑的品種）擦拭操作臺(tái)及可能污染的死角，方法是用無菌紗布浸漬消毒溶液清潔超凈臺(tái)的整個(gè)內(nèi)表面、頂面、及無菌室、人流、物流、緩沖間的地板、傳遞窗、門把手。清潔消毒程序應(yīng)從內(nèi)向外，從高潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)。逐步向外退出潔凈區(qū)域。然后開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌1—2h，以殺滅存留微生物。在每次操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺(tái)面，除去室內(nèi)濕氣，用紫外燈殺菌30min。

（7）其他要求：如遇停電，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)，離開無菌室。關(guān)閉所有電閘。重新進(jìn)入無菌室前至少開啟機(jī)房運(yùn)轉(zhuǎn)1h以上。

4、潔凈度檢查的要求與方法：無菌室在消毒處理后，無菌試驗(yàn)前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來判斷無菌室是否達(dá)到規(guī)定的潔凈度，常有沉降菌和浮游菌測(cè)定方法。

（1）沉降菌檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn)：以無菌方式將3個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)臺(tái)面左、中、右各放1個(gè)；打開平板蓋，在空氣 中暴露30min后將平板蓋好，置32.5℃士2.5℃培養(yǎng)48h，取出檢查，3個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均小于1個(gè)。

（2）浮游菌檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn)：用專門的采樣器，宜采用撞擊法機(jī)制的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，并配有流量計(jì)和定時(shí)器，嚴(yán)格按儀器說明書的要求操作并定時(shí)校檢，采樣器和培養(yǎng)皿進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認(rèn)可的其他培養(yǎng)基。使用時(shí)，先開動(dòng)真空泵抽氣，時(shí)間不少于5min，調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤、轉(zhuǎn)速 。關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上采樣器蓋子后調(diào)節(jié)縫隙高度。置采樣口采樣點(diǎn)后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿置32.5℃士2.5培養(yǎng)48h，取出檢查，浮游菌落數(shù)平均不得超過5個(gè)/m3。

每批培養(yǎng)基應(yīng)選定3只培養(yǎng)皿做對(duì)照培養(yǎng)。

無菌操作臺(tái)面或超凈工作臺(tái)還應(yīng)定期檢測(cè)其懸浮粒子，應(yīng)達(dá)到100級(jí)（一般用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀）檢測(cè)，并根據(jù)無菌狀況必要時(shí)置換過濾器。

5、定期進(jìn)行潔凈度再驗(yàn)證：定期（每季度、半年、1年）或當(dāng)潔凈室設(shè)施發(fā)生重大改變時(shí)，要按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16292-16294-1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》進(jìn)行潔凈度再驗(yàn)證，以確保潔凈度符合規(guī)定，保存驗(yàn)證原始記錄，定期歸檔保存，并將驗(yàn)證結(jié)果記錄在無菌室使用登記冊(cè)上，作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原始依據(jù)及趨勢(shì)分析資料。并定期對(duì)潔凈室的環(huán)境檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行趨勢(shì)分析和評(píng)估，根據(jù)評(píng)估結(jié)果，了解潔凈室設(shè)施環(huán)境質(zhì)量的穩(wěn)定狀況及變化趨勢(shì)，決定是否有必要修訂相應(yīng)的警戒和糾偏限度。

6、定期更換新的紫外燈管、更換凈化系統(tǒng)的初效、中效、高效頭：定期（至少每年1次）更換新的紫外燈管，以確保紫外燈管滅菌持續(xù)有效。并同時(shí)在使用登記本上做好更換記錄，定期歸檔保存。至少2年1次，或按潔凈度驗(yàn)證實(shí)際情況，定期更換初效、中效、高效頭。以確保凈化系統(tǒng)的功能持續(xù)有效，并同時(shí)在使用登記本上做好更換記錄，定期歸檔保存。

7、使用過程中應(yīng)盡可能減少人員的走動(dòng)或活動(dòng)：平時(shí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)盡可能減少人員的走動(dòng)或活動(dòng)，同向潔凈室的門要關(guān)閉或安裝自動(dòng)閉門器使其保持關(guān)閉狀態(tài)。

8、潔凈度不符合規(guī)定時(shí)立即停止使用：發(fā)現(xiàn)潔凈度不符合規(guī)定時(shí)，應(yīng)立即停止使用，尋找原因，清潔、必須經(jīng)潔凈度再驗(yàn)證符合規(guī)定后，才再使用，并同時(shí)將情況記錄在無菌室使用登記冊(cè)上，定期歸檔保存。

9、對(duì)進(jìn)入的外來人員或維修人員進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督：非微生物室檢驗(yàn)人員不得進(jìn)入潔凈室（無菌室），對(duì)必須進(jìn)入的外來人員或維修人員要進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督。

10、潔凈室（無菌室）的日常管理：建立安全衛(wèi)生值日制度，一旦發(fā)現(xiàn)通風(fēng)系統(tǒng)、墻壁、天花板、地面、門窗及公用介質(zhì)系統(tǒng)等設(shè)施有損壞現(xiàn)象，要及時(shí)報(bào)告并采取相應(yīng)的修復(fù)措施，并保存記錄及時(shí)歸檔。從潔凈室（無菌室）環(huán)境中檢測(cè)到的微生物應(yīng)能鑒別至屬或種，保留鑒別實(shí)驗(yàn)原始記錄及菌種，作為無菌生產(chǎn)、無菌檢查潔凈室環(huán)境質(zhì)量、消毒劑有效性評(píng)估及污染源調(diào)查的依據(jù)，并且也是為無菌檢查陽(yáng)性結(jié)果的調(diào)查提供第