高通量細(xì)胞形變力學(xué)特性測試分析系統(tǒng)
來自德國的高通量單細(xì)胞形變測量分析系統(tǒng)
該系統(tǒng)是一套基于微流控流體壓力梯度的、在倒置顯微鏡的擴(kuò)展起來的、集成流式細(xì)胞儀特性、熒光檢測模塊、溫控模 塊、高速成像和數(shù)據(jù)采集分析軟件的高通量單細(xì)胞實(shí)時形變測量和單細(xì)胞力學(xué)性質(zhì)分析系統(tǒng)。
是一種以流式細(xì)胞儀的速度檢測單個細(xì)胞形態(tài)和力學(xué)性質(zhì)的技術(shù)!
細(xì)胞被泵送通過微流控芯片。 每個細(xì)胞都被實(shí)時拍攝、分析和成像存儲。 此外,非破壞性的力量應(yīng)用于細(xì)胞,提供一種方便,穩(wěn)健和高通量的技術(shù)進(jìn)行生物標(biāo)志物的檢測,可用于基礎(chǔ)科學(xué)和臨床研究。
探索細(xì)胞的物理特性作為生物標(biāo)志物,可以將非破壞性的力量應(yīng)用于細(xì)胞或珠子,并觀察它們的變形。 這允許研究對物理壓力的特定機(jī)械響應(yīng)。
優(yōu)勢亮點(diǎn):
- 機(jī)械力學(xué)作為一種新的生物標(biāo)志物--溫和無損傷
- 無標(biāo)記
- 非破壞性的力量
- 高速測量單個細(xì)胞的形變、亮度、楊氏模量等
- 細(xì)胞機(jī)械特性測量高通量(1000細(xì)胞/秒)
- 配有高速成像、熒光檢測、溫控模塊
- 不需要細(xì)胞分離/純化
- 文獻(xiàn)量大、級別高文章達(dá)數(shù)十篇
成像
每個細(xì)胞被同時拍照、分析和儲存。 這允許通過它們的光學(xué)特性來找到小亞群或區(qū)分細(xì)胞。 另外可以研究像表面拓?fù)浠蚣?xì)胞對光的衰減的形態(tài)特性。
- 每個獲取圖像的存儲
- 快速訪問細(xì)胞大小和形態(tài)
流式細(xì)胞技術(shù)
細(xì)胞通過微流通道時,提取細(xì)胞變形、亮度和大小等參數(shù),同時。 這允許實(shí)時地研究細(xì)胞屬性。
可溫控和熒光檢測
實(shí)時變形細(xì)胞計(jì)數(shù)和同時熒光檢測:
熒光模塊使得該系統(tǒng)不再只是附加了一個額外的細(xì)胞力學(xué)檢測通道的流式細(xì)胞儀。它成為了生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室的得力工具 - 提供了更多視角來解決科學(xué)問題。在生物學(xué)研究中通常使用熒光流式細(xì)胞儀來鑒定和定量細(xì)胞和細(xì)胞過程。使該系統(tǒng)集熒光流式細(xì)胞儀和實(shí)時變形的優(yōu)點(diǎn)于一身,形成了實(shí)時熒光形變細(xì)胞儀。光片激發(fā)設(shè)計(jì)可實(shí)現(xiàn)三通道1D熒光成像。除了所有實(shí)時變形參數(shù)外,系統(tǒng)還會分析熒光信號實(shí)時得到峰圖,速度可達(dá)每秒1000個細(xì)胞。也可在實(shí)驗(yàn)后處理保存的原始熒光數(shù)據(jù),以針對特定的問題和需 求修改處理方法。
1)根據(jù)表面marker鑒定血細(xì)胞:
熒光模塊可檢測和鑒定同一樣品中的三種不同熒光。利用標(biāo)記的表面熒光蛋白可同時實(shí)現(xiàn)細(xì)胞鑒定和力學(xué)性質(zhì)及形態(tài)性質(zhì)測量。 下圖為 G-CSF動員的外周血樣品細(xì)胞群體。 標(biāo)記后的細(xì)胞表面markers CD3-FITC (T-cells), CD34-PE (造血干細(xì)胞)和CD14-APC(單核細(xì)胞)熒光強(qiáng)度檢測 揭示了各細(xì)胞類型所具有的不同力學(xué)性質(zhì)。
2)一維熒光成像:
熒光模塊在激發(fā)光路徑中產(chǎn)生一束受限光片,穿過流道,細(xì)胞會經(jīng)過一束很窄的激發(fā)光幕。這樣可以進(jìn)行1D熒光成像,例如可用于解析沿流動方向的熒光標(biāo)記結(jié)構(gòu)的側(cè)向分布。檢測到的熒光峰值帶有很多重要信息。熒光標(biāo)記的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)(如細(xì)胞核)會顯示窄峰,而胞質(zhì)會顯示出更寬的峰。不同分裂期細(xì)胞中標(biāo)記的組蛋白也會呈現(xiàn)出不同的峰圖.
加熱模塊 - 溫度控制
加熱模塊實(shí)現(xiàn)了生理溫度下的測量。加熱模塊帶有一個300 W的加熱器和幾個靜默通風(fēng)機(jī)來有效混合熱空氣??拷鼧悠诽幱幸粋€傳感器和一個控制單元,用以地將溫度控制在所需值。系統(tǒng)的空氣循環(huán)系統(tǒng)非常高效,當(dāng)進(jìn)行開放操作(如更換樣品)后可以迅速恢復(fù)溫度。
高速攝像
該成像模塊是款高速明場攝像顯微鏡,使用同步化微秒高強(qiáng)度LED光源減輕運(yùn)動模糊,可進(jìn)行極慢運(yùn)動攝影.每秒可記錄500幅全幀圖像或10000幀小區(qū)域圖像典型應(yīng)用:
1)檢測細(xì)胞骨架改變:
通過力學(xué)分析可量化細(xì)胞骨架的變化。使用松胞素D抑制微絲會導(dǎo)致較大的形變,降低HL60細(xì)胞的剛度。有些細(xì)胞可通過亮度和大小等圖像性質(zhì)區(qū)分。這就可對全血樣本中的紅細(xì)胞、血小板甚至白細(xì)胞亞群進(jìn)行鑒定和進(jìn)一步研究,無需進(jìn)行標(biāo)記和純化。
2)研究既往條件效應(yīng)
以前研究,通常使用跨膜蛋白CD34來鑒定原代人外周造血干細(xì)胞(HSCs)。下圖比較了從骨髓得到的CD34+ 細(xì)胞和粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)動員的外周血CD34+細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)外周血HSCs比骨髓HSCs更硬。
3)解析中性粒細(xì)胞激活動力學(xué)
高測量速度和快速樣品制備的特點(diǎn)使得觀察動力學(xué)過程成為可能。下圖為中性粒細(xì)胞暴露于fMLP后力學(xué)性質(zhì)的改變。一些細(xì)菌會釋放fMLP三肽,是一種感染信號,會激活免疫系統(tǒng)細(xì)胞。
3)解析中性粒細(xì)胞激活動力學(xué)