原因1：配制流動相時細菌污染

首先我們要認識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：

（1）使用實驗室專用純水機，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。

（2） 成箱購買市售品牌純凈水，先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗，待菌落數(shù)合格方可使用。

原因2：使用流動相時的細菌污染

流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產(chǎn)生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。舉個簡單的例子：50％的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。

從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例準確，能得到保留時間重復性較好的實驗效果。

但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，細菌長得更迅速），一旦有細菌柱子就壞得很快。

所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。可用10％的甲醇水代替純水溶液，這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。

原因3：不適當操作

常見問題有以下幾種： 

（1）在更換零件時選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。

（2）樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。

（3）在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉(zhuǎn)動的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。

（4）在使用金屬管路作出廢液管時，應當注意最好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發(fā)生過。