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(技術(shù)篇)使用快速簡便的ELISA試劑盒需注意哪些?
閱讀:1271 發(fā)布時間:2017-1-16上海恒遠ELISA試劑盒擁有快速、簡便、準確、靈敏度高等幾大特點。ELISA實驗條件主要由實驗室的操作環(huán)境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成,但試劑盒對實驗室操作環(huán)境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的,人為的誤差相對嚴重一些。今天上海恒遠小編就來分享(技術(shù)篇)使用快速簡便的ELISA試劑盒需注意哪些問題及解決辦法:
問:加入稀釋劑是否會將樣本進一步稀釋?
答:因為稀釋劑是加入到所有的孔中,標準和被測樣本都被同樣稀釋,所以樣本的濃度可從標準曲線讀出,而不需作稀釋調(diào)整。
問:為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度?
答:靈敏度是統(tǒng)計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復(fù)制物的中值加兩個標準差從標準曲線換算成分析物的濃度。而zui低標準是我們可以放心的、仍可與標準曲線成直線相關(guān)的zui低點,因而是可定量的。
問:標準曲線為什么要采用4-pl擬合?
答:R&D在研發(fā)和質(zhì)控我們絕大多數(shù)的quantikine ELISA試劑盒時,采用4-相參數(shù)的曲線擬合。一般來說,它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數(shù)據(jù)分析不可用4-pl的話,log-log是下一個的選擇。
問:試驗步驟中說要用500rpm,我的搖床達不到。這個速度是正確的嗎?
答:500rpm使用的是0.12英寸的震蕩軌道。如果你的震蕩器用更大的震蕩軌道,500rpm的確是過快了。在這種情況下,你應(yīng)根據(jù)R&D Systems的建議重新調(diào)整震蕩速度。你可拿一個多余的96孔微孔板,加入洗液,洗液的量與實驗時孔中的溶液量一致;封板后,調(diào)整震蕩器的速度,直到液體在孔的上部劇烈旋轉(zhuǎn)但不濺到封膜上或產(chǎn)生泡沫為止。
問:quantikine ELISA試劑為什么需要做稀釋?
答:① 在絕大多數(shù)的樣本中細胞因子的含量非常高,如不經(jīng)稀釋,讀數(shù)將高于標準曲線;②也是zui普遍的原因我們建議做稀釋,是將樣本中的干擾或基質(zhì)效應(yīng)稀釋掉。
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