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ELISA的多項(xiàng)環(huán)節(jié)注意（內(nèi)附示意圖）
閱讀：1422 發(fā)布時(shí)間：2014-8-21 
今日上午上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司的一位多年老客戶吳老師來電給我公司訂購(gòu)白介素6試劑盒，在咨詢的過程中吳老師說：“還記得我*次實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，那時(shí)候什么都不懂，也不知道找你們的。再想想現(xiàn)在，實(shí)驗(yàn)做的多了自然就熟練了，也不會(huì)那么容易出錯(cuò)了。其實(shí)現(xiàn)在想想，只要在ELISA的每個(gè)環(huán)節(jié)都能細(xì)心做好，稍加注意就能做出很不多的實(shí)驗(yàn)了”
· 選擇試劑
選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
· 加樣
| 出錯(cuò)的可能原因 |
| 血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。 |
| 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)。 |
| 加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。 |
| 解決辦法 |
| 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 |
| 加樣后及時(shí)放入孵箱。 |
| 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 |
| 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 |
| 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。 |
· 孵育
| 可能原因 | 解決辦法 |
| 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*。 | 貼封片或加蓋。 |
| 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。 | 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。 |
· 洗板
| 可能原因 |
| 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。 |
| 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 |
| 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 |
| 解決辦法 |
| 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干。 |
| 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。 |
· 顯色
· 終止
可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
· 讀板
如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
其實(shí)我們?cè)趯?shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。