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豬禽流感H5N1(AIV-H5N1)檢測試劑盒說明書

閱讀:194          發(fā)布時間:2015-8-19
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豬禽流感H5N1(AIV-H5N1)酶聯(lián)免疫分析


試劑盒使用說明書



本試劑盒僅供研究使用。



96T



使用目的:

本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中禽流感 H5N1(AIV-H5N1)表達。 實驗原理

劑盒法測定標 H5N1(AIV-H5N1)。純化的禽

H5N1(AIV-H5N1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中禽流感 H5N1(AIV-H5N1)相 結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP H5N1(AIV-H5N1)抗 體結(jié)合,形成抗體--合物,經(jīng)加底TMB 色。TMB HRP 酶 的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長定 吸光度(OD CUTOFF 比較,判定本中 H5N1(AIV-H5N1)存 在與否。

試劑盒組成


1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

陽性對照

0.5ml×1

3

酶標包被板

12 ×8

9

陰性對照

0.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑 A

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑 B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要

1標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步

1.     號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 、性對照 2 孔、空白對照 1

孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)




2.    :分陰、陽對照孔入陰對照、陽性 50μl。后在待樣品先 加樣品稀釋液 40μl,后再10μl。加酶標孔底不 觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

3.     溫育:用封板膜封板后置 37溫育 30 分鐘。

4.     配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 后棄去,如此 重復 5 次,拍干。

6.     加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。


7.     溫育:操作同 3。

8.     洗滌:操作同 5

9.     色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.   定:以空白空調(diào)零,450nm 長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。




操作程序總結(jié):






計算和結(jié)果判定:

試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品 OD < 臨界值(CUT OFF)者為禽流感 H5N1(AIV-H5N1)陰性 陽性判定:樣品 OD 臨界值(CUT OFF)者為禽流感 H5N1(AIV-H5N1)陽性

。

注意事


1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。

3濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

4 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須 注意安全。

保存條件及有效期

1試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

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