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豬禽流感H5N1(AIV-H5N1)檢測試劑盒說明書
閱讀:194 發(fā)布時間:2015-8-19提 供 商 | 上海恒遠生物科技有限公司 | 資料大小 | 167.8KB |
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資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 194次 |
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豬禽流感H5N1(AIV-H5N1)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
96T
使用目的:
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中禽流感 H5N1(AIV-H5N1)表達。 實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬禽流感 H5N1(AIV-H5N1)表達。用純化的禽流感
H5N1(AIV-H5N1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中禽流感 H5N1(AIV-H5N1)相 結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的禽流感 H5N1(AIV-H5N1)抗 體結(jié)合,形成抗體-抗原-抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶 的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定 吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本中豬禽流感 H5N1(AIV-H5N1)的存 在與否。
試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不 觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
計算和結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為禽流感 H5N1(AIV-H5N1)陰性 陽性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為禽流感 H5N1(AIV-H5N1)陽性
。
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須 注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月