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免疫膠體金固定劑的選擇與使用方法
閱讀:137 發(fā)布時(shí)間:2015-7-21提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 28.5KB |
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資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 137次 |
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免疫膠體金銀染色和其它免疫細(xì)胞化學(xué)方法一樣,要想得到好的染色效果,關(guān)鍵取決于標(biāo)本處理是否適當(dāng),只有使抗原性及組織結(jié)構(gòu)保存的好,才能使后續(xù)的染色成功成為可能,其次要用高特異性和價(jià)的一抗,選擇合適的稀釋度。由于免疫組化方法廣泛應(yīng)用于不同的生物學(xué)科,所要檢出的抗原種類繁多,性質(zhì)也各不相同。因此,不可能有一種適用于所有抗原的固定劑,而是根據(jù)不同的抗原性質(zhì)區(qū)別對待。根據(jù)我們使用的固定劑介紹如下,僅供參考。
固定劑的選擇及其相應(yīng)的固定時(shí)間
(1)酶:冰凍切片不固定,或用95%乙醇,固定時(shí)間為10min。
(2)激素:冰凍切片、涂片、印片,不固定或bing酮、甲醇、乙醇、PEG固定。固定時(shí)間為4℃*30min。
(3)免疫球蛋白:中性福爾馬林、四lv化碳(1%甲醛),固定時(shí)間為30min。
(4)白蛋白:95%乙醇含1~5%冰醋酸。固定時(shí)間為30min。
(5)纖維蛋白原:95%乙醇含1%~5%冰醋酸。固定時(shí)間為30min。
(6)病毒:bing酮、100%乙醇、甲醇、yi醚。固定時(shí)間為30min。
(7)糖蛋白:PLP、bing酮。固定時(shí)間為30min。
(8)脂質(zhì): Forssman 中性福爾馬林。固定時(shí)間為20min。
(9)抗原: 2.5%硫代硫酸鈉,冰凍切片不固定。固定時(shí)間為20min。
(10)免疫電鏡:PLP、戊二醛、戊二醛-多聚甲醛、ECD-G等。固定時(shí)間為30min。
切片的處理與粘附
免疫組化染色過程較復(fù)雜,洗滌的次數(shù)較多,而且均需振蕩洗滌,抗原片粘貼不牢,往往在zui后的時(shí)刻,還沒有等顯色就會(huì)脫落導(dǎo)致前功盡棄,這個(gè)環(huán)節(jié)雖小卻會(huì)影響大局。因此,為了保證切片染色成功,必須把切片處理好,解除脫片的后顧之憂。