技術文章
詳說免疫試劑的特異性|比例|敏感性
閱讀:1871 發(fā)布時間:2014-9-19 今天是本周的zui后一個工作日了,在明后兩天中如果您有需要咨詢的產(chǎn)品價格及技術信息可在本中留言。今天上海恒遠為您詳說免疫試劑的特異性|比例|敏感性。
·特異性
抗原抗體的結合實質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系,所以抗原抗體反應具有高度的特異性。抗原抗體反應的這種特異性使免疫測定能在一非常復雜的蛋白質(zhì)化合物中測定某一特定的物質(zhì),而不需先分離待檢物。
但是這種特異性也不是的。假使兩種化合物有著部分相同的結構,在抗原抗體反應中可出現(xiàn)交叉反應。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體,抗α-hCG抗體將與LH中的
α酶位發(fā)生交叉反應。在臨床檢驗中,如用抗hCG抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG,只能用于hCG濃度較高的試驗,否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發(fā)生交叉反應。因此在作為早孕診斷(敏感度應達到50mIu/mlhCG)的實際中必須應用只對hCG特異的抗β-hCG,以避免與其它激素的交叉反應的發(fā)生。
·zui適比例
在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復合物的量。曲線的高峰部分是抗原抗體比例zui合適的范圍,稱為等價帶。在等價帶前后分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶。如果抗原或抗體極度過剩,則無沉淀物形成,在免疫測定中稱為帶現(xiàn)象。抗體過量稱為前帶,抗原地過量稱為后帶。在用免疫學方法測定抗原時,應使反應系統(tǒng)中有足夠的抗體量,否則測得的量會小于實際含量,甚至出現(xiàn)假陰性。
免疫試劑測定是一種很敏感的測定方法,抗原抗體反應后直接測定形成的沉淀或濁度,敏感度可達5~10μg/ml,但在臨床檢驗中,某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平,因此要尋找增加敏感度的方法。標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標記,通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和酶免疫測定中,標記物分別為放射性核素和酶,zui后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量,敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標記免疫測定中,一般加入過量的標記試劑以保證與待測物*反應。
·敏感性
在測定血清中某一物質(zhì)的含量時,化學比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應測定法的敏感度約為5~10μg/ml,免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數(shù)千倍,達ng/ml水平。例如,用放射免疫測定法或免疫試劑測定法測定HBsAg,其敏感度可達0.1ng/ml。