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酶聯(lián)免疫的條件與測定方法有什么關(guān)系
閱讀:1511 發(fā)布時(shí)間:2014-9-17 實(shí)驗(yàn)要在良好的環(huán)境中執(zhí)行操作,實(shí)驗(yàn)的條件也是非常重要的,而針對(duì)酶聯(lián)免疫測定的條件與其測定方法有著一定的關(guān)系,今天上海恒遠(yuǎn)就來和您說說它們之前有什么關(guān)系。
定性測定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出有或無的簡單回答,分別用陽性、陰性表示。 表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng),陰性則為無反應(yīng)。
用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義。
在間接法和夾心法ELSIA中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。
而酶聯(lián)免疫試劑盒的回收率與真實(shí)成分有緊密的關(guān)系,回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,假如作標(biāo)液1PPM,就是1毫克/升,而作出尺度數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說您的回收率是99%,這個(gè)說明了方法的正確度。
·空白管陽性高:
1.樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率。
2.空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染,實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染。
3.水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替。
·假陰、陽性:
1.水質(zhì)原因:點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證,用娃哈哈礦泉水代替;
2.實(shí)驗(yàn)操作原因。吸取到其它相吹干,準(zhǔn)確的取液吹干。離心不*,延長離心時(shí)間。樣本的污染,更換樣本乳化未處理*。溫?。?0℃)處理乳化現(xiàn)象;
3.儀器試劑原因。離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具。有機(jī)溶劑的影響,做試劑空白看影響結(jié)果;
4.衍生化試劑原因(長時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑;
5.與曲線好壞相關(guān),保證曲線的正常。
在從冰箱拿出的標(biāo)本要預(yù)溫至室溫,對(duì)冰凍的樣品要融化好,并充分混勻再用。假如忽視了影響其結(jié)果的因素,難免會(huì)造成假陰性或假陽性。了解影響實(shí)驗(yàn)的因素,減少差錯(cuò)事故的發(fā)生是極其必要的。對(duì)不能及時(shí)檢測的標(biāo)本要妥善保留于4℃冰箱,做好原始記實(shí),標(biāo)本管上標(biāo)上待檢者姓名、日期。
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