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酶聯(lián)免疫的條件與測定方法有什么關(guān)系
閱讀:1512 發(fā)布時間:2014-9-17 實驗要在良好的環(huán)境中執(zhí)行操作,實驗的條件也是非常重要的,而針對酶聯(lián)免疫測定的條件與其測定方法有著一定的關(guān)系,今天上海恒遠就來和您說說它們之前有什么關(guān)系。
定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出有或無的簡單回答,分別用陽性、陰性表示。 表示該標本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng),陰性則為無反應(yīng)。
用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強度,其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中,將標本作一系列稀釋后進行試驗,呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標本反應(yīng)性的強弱,這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。
在間接法和夾心法ELSIA中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。
而酶聯(lián)免疫試劑盒的回收率與真實成分有緊密的關(guān)系,回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,假如作標液1PPM,就是1毫克/升,而作出尺度數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說您的回收率是99%,這個說明了方法的正確度。
·空白管陽性高:
1.樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率。
2.空白管在實驗中被污染,實驗中防止交叉污染。
3.水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替。
·假陰、陽性:
1.水質(zhì)原因:點復(fù)溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替;
2.實驗操作原因。吸取到其它相吹干,準確的取液吹干。離心不*,延長離心時間。樣本的污染,更換樣本乳化未處理*。溫浴(70℃)處理乳化現(xiàn)象;
3.儀器試劑原因。離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具。有機溶劑的影響,做試劑空白看影響結(jié)果;
4.衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑;
5.與曲線好壞相關(guān),保證曲線的正常。
在從冰箱拿出的標本要預(yù)溫至室溫,對冰凍的樣品要融化好,并充分混勻再用。假如忽視了影響其結(jié)果的因素,難免會造成假陰性或假陽性。了解影響實驗的因素,減少差錯事故的發(fā)生是極其必要的。對不能及時檢測的標本要妥善保留于4℃冰箱,做好原始記實,標本管上標上待檢者姓名、日期。
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