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凝膠制備中有哪些方法
閱讀:1618 發(fā)布時(shí)間:2013-9-3凝膠制備中有哪些方法
凝膠制備:
1.玻璃板對(duì)齊后放入夾中,垂直卡緊,加滿水檢漏。
2.配10%分離膠,APS和TEMED作用為促凝,zui后灌膠前加。若板不漏水,則將水倒出,并用吸水紙洗凈后灌膠,灌至大約3/4處,上面加滿水壓平。
3.配濃縮膠,同樣地,APS和TEMEDzui后加,分離膠灌入約30min后觀察小燒杯中剩余分離膠是否已凝,同時(shí)仔細(xì)觀察可見(jiàn)玻板水和膠間有一條折線,說(shuō)明膠已凝固。
4.將上面的水倒去,吸水紙洗凈,灌入濃縮膠,灌滿,注意一定不要有氣泡,然后將梳子插入,注意保持水平,約30min后凝固可用。
5.拔梳子在電泳緩沖液中拔,加樣孔用小針筒沖洗干凈再上樣,注意上樣時(shí)勿使樣品逸至鄰孔,樣品混勻時(shí)要輕,不要產(chǎn)生氣泡,否則加樣時(shí)易導(dǎo)致逸出而使結(jié)果不準(zhǔn)確。
上海恒遠(yuǎn)以*產(chǎn)品為標(biāo)準(zhǔn),自主研究開(kāi)發(fā)了一系列應(yīng)用于分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、免疫學(xué)研究的相關(guān)產(chǎn)品,并代理了國(guó)外Amresco、Sigma、Pharmacia等品牌的生物試劑,力爭(zhēng)成為生物技術(shù)zui的產(chǎn)品供應(yīng)商。Ø
酶譜法的基本過(guò)程是先將樣品進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價(jià)金屬離子存在的緩沖系統(tǒng)中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復(fù)活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,zui后用考馬斯亮藍(lán)將凝膠染色,再脫色,在藍(lán)色背景下可出現(xiàn)白色條帶,條帶的強(qiáng)弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。咨詢?cè)敿?xì)信息。