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技術(shù)文章

IgA的純化操作步驟

閱讀:2403          發(fā)布時(shí)間:2013-8-23

 
IgA的純化
 
    血清中IgA的含量較低,一般從乳汁中提取分泌型IgA。
 
   【材料和試劑】
(1)人初乳Xml。
(2)生理鹽水(NS),HCl。
(3)2mol/L Tris,0.1mol/L pH6.3 PB。
(4)0.01mol/L, pH7.5(含0.1mol/L NaCl)和0.01mol/L,pH7.7(含0.25mol/L NaCl)的PB。
 
   【操作步驟】
(1)取Sephadex G-200 25g,經(jīng)蒸餾水充分膨脹后,以0.01mol/L,pH6.3的PB平衡并裝柱,柱床體積為2.5cm×100cm。
(2)將10ml NS緩慢加入初乳中,混勻,43000r/min 4℃離心60min。
 
(1)吸出中層乳清液,以1mol/L HCl調(diào)至pH4.0,4℃ 24000r/min離心30min。
(2)吸取上清以2mol/L Tris 調(diào)至pH7.3,同上離心,取上清,以0.45μm硝酸纖維素膜過(guò)濾。
(3)收集濾出液過(guò)Sephadex G-200層析柱,以0.01mol/L,pH6.8 的PB低溫洗脫,0.3~0.5ml/min,分部收集,并以紫外監(jiān)測(cè)儀280nm監(jiān)測(cè)。
(4)*峰以IgM為主,第二峰為IgA,第三峰為IgG,收集合并第二峰各管,裝入透析袋中。
(5)對(duì)0.01mol/L,pH7.5(含0.1mol/L NaCl)的PB透析4~6h。
(6)過(guò)DEAE-Sephadex A-50柱,以0.01mol/L,pH7.5(含0.1mol/L NaCl)的PB洗脫至OD 280nm< 0.02。
(7)改用含0.25mol/L NaCl的PB洗脫,分部收集,280nm測(cè)蛋白峰,收集合并含蛋白的洗脫峰,濃縮后置-20℃保存。
我司多種*抗體展示:
純化抗體  
品名 包裝
羊抗人 IgG  1mg
羊抗人 IgG  10mg
羊抗人 IgG  100mg
羊抗小鼠 IgG  1mg
羊抗小鼠 IgG  10mg
羊抗小鼠 IgG  100mg
羊抗兔 IgG  1mg
羊抗兔 IgG  10mg
羊抗兔 IgG  100mg
羊抗人 IgM  1mg
羊抗人 IgM  10mg
羊抗人 IgM  100mg
羊抗人 IgA  1mg
羊抗人 IgA  10mg
羊抗人白蛋白  1mg
羊抗人白蛋白  10mg
羊抗人纖維蛋白原  1mg
羊抗人纖維蛋白原  10mg
兔抗羊 IgG  1mg
兔抗羊 IgG  10mg
兔抗豬 IgG  1mg

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