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技術(shù)文章

學(xué)習(xí)細(xì)菌的鞭毛染色法之鍍銀法染色

閱讀:3965          發(fā)布時(shí)間:2013-8-21

實(shí)驗(yàn)原理:細(xì)菌的鞭毛極細(xì),直徑一般為10—20nm,只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是,如采用特殊的染色法,則在普通光學(xué)顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色方法很多,但其基本原理相同,即在染色前先用媒染劑處理,讓它沉積在鞭毛上,使鞭毛直徑加粗,然后再進(jìn)行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成?,F(xiàn)推薦以下兩種染色法。實(shí)驗(yàn)方法

1.鍍銀法染色

(1)清洗玻片  選擇光滑無裂痕的玻片,選用新的。為了避免玻片相互重疊,應(yīng)將玻片插在金屬架上,然后將玻片置洗衣粉過濾液中(洗衣粉煮沸后用濾紙過濾,以除去粗顆粒),煮沸20min。取出稍冷后用自來水沖洗、晾干,再放入濃洗液中浸泡5—6天,使用前取出玻片,用自來水沖去殘酸,再用蒸餾水洗。將水瀝干后,放入95%乙醇中脫水。

(2)菌液的制備及制片:菌齡較老的細(xì)菌容易失落鞭毛,所以在染色前應(yīng)將待染細(xì)菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上(培養(yǎng)基表面濕潤,斜面基部含有冷凝水)連續(xù)移接3-5代,以增強(qiáng)細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)力。zui后一代菌種放恒溫箱中培養(yǎng)12—16h。然后,用接種環(huán)挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數(shù)環(huán),移至盛有1—2mL無菌水的試管中,使菌液呈輕度混濁。將該試管放在37℃恒溫箱中靜置10min(放置時(shí)間不宜太長,否則鞭毛會(huì)脫落),讓幼齡菌的鞭毛松展開。然后,吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端,立即將玻片傾斜,使菌液緩慢地流向另一端,用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。

用于鞭毛染色的菌體也可用半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)。方法是將0.3-0.4%的瓊脂肉膏培養(yǎng)基熔化后倒入無菌平皿中,待凝固后在平板中央點(diǎn)接活化了3-4代的細(xì)菌,恒溫培養(yǎng)12-16h后,取擴(kuò)散菌落的邊緣制作涂片。

(3)染色

①滴加A液,染4—6min。

②用蒸餾水充分洗凈A液。

③用B液沖去殘水,再加B液于玻片上,在酒精燈火焰上加熱至冒氣,約維持0.5—1min(加熱時(shí)應(yīng)隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)掉的染料,不可使玻片出現(xiàn)干涸區(qū))。

④用蒸餾水洗,自然干燥。

(4)鏡檢:先低倍,再高倍,zui后用油鏡檢查。

結(jié)果:菌體呈深褐色,鞭毛呈淺褐色。

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