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如何運(yùn)用單克隆-多克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色 
    在細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)中，常用單克隆或多克隆抗體。一般而言，多抗能夠提供較強(qiáng)的信號(hào)，而單抗的背景清晰。只要注意其特點(diǎn)，2種抗體都可以有效地利用。
 
（一）用多克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色
    良好的多抗血清包含多種針對(duì)抗原不同表位的抗體，雖然空間競(jìng)爭(zhēng)阻止大量抗體與抗原分子結(jié)合，但數(shù)個(gè)抗體分子的結(jié)合往往得到較強(qiáng)的信號(hào)。能夠產(chǎn)生信號(hào)強(qiáng)信號(hào)是用多抗進(jìn)行細(xì)胞染色的主要優(yōu)點(diǎn)。
    多抗血清中除了含有特異性抗體外，還含有較高濃度的無(wú)關(guān)抗體，這些抗體包括動(dòng)物血清中所有的抗體成分。這些抗體是細(xì)胞染色的zui大。用多克隆抗體可以帶來(lái)令人滿(mǎn)意的結(jié)果，但必須仔細(xì)設(shè)立對(duì)照。這包括仔細(xì)滴定一抗，盡量減低無(wú)關(guān)抗體產(chǎn)生的信號(hào)，仔細(xì)比較對(duì)照血清的染色結(jié)果。
    即使血清來(lái)自未經(jīng)免疫的動(dòng)物，在高濃度情況下，也能引起較強(qiáng)的背景色。部分原因是由于抗體的非特異性附著在經(jīng)固定后的細(xì)胞上，部分是由于血清中抗體特異性結(jié)合所致。由于這些抗體在血清中并非主要活性成分，因此可以通過(guò)稀釋抗體使其信號(hào)降低至不被檢測(cè)出的程度。第二種降低這些背景信號(hào)的方法是用丙酮干燥粉預(yù)先吸收多抗血清。第三種方法是去除血清中的非特異性抗體，利用免疫親和純化的方法可以得到適用于細(xì)胞染色的良好的抗體來(lái)源。在某些情況下，利用免疫親和法純化抗體是得到清晰染色結(jié)果的基本步驟之一。
    由于多抗血清包含的抗體通常是針對(duì)抗原的多種表位，包括不易變性的表位，因此這些抗血清在用于經(jīng)過(guò)*固定的標(biāo)本染色時(shí)效果較好，尤其是用于經(jīng)甲醛固定標(biāo)本的染色。
 
（二）用單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色
    用單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色往往得到良好結(jié)果，因?yàn)閱慰辜兌雀?、特異性?qiáng)，在較寬的濃度范圍內(nèi)染色的背景色清晰。對(duì)經(jīng)有機(jī)溶劑或甲醛固定的細(xì)胞，大部分單抗可以得到較好的染色結(jié)果，盡管如此，部分單抗的染色結(jié)果不理想。這可能由下列兩個(gè)原因造成：抗原表位被覆蓋在細(xì)胞結(jié)構(gòu)之內(nèi)；或者在固定過(guò)程中被破壞。
    用單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色時(shí)偶爾也出現(xiàn)交叉反應(yīng)。這種交叉反應(yīng)是特異性的，可能是因?yàn)樵诓煌募?xì)胞組分中存在共同表位。單抗與細(xì)胞內(nèi)高濃度多聚體蛋白，如細(xì)胞骨架蛋白所致的交叉反應(yīng)是常見(jiàn)的。這種交叉反應(yīng)一般較弱，但如果抗原濃度較高且雙價(jià)連接，將使交叉反應(yīng)信號(hào)增強(qiáng)。應(yīng)盡可能應(yīng)用一系列針對(duì)同一抗原不同表位的單克隆抗體來(lái)確定抗原的位置。
 
（三）用混合的單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞染色
應(yīng)用混合單抗進(jìn)行細(xì)胞染色能夠增強(qiáng)染色信號(hào)，只要混合的單抗沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)作用，增強(qiáng)信號(hào)強(qiáng)度意味著實(shí)驗(yàn)成功。但應(yīng)注意，在混合抗體前，每一種單抗應(yīng)分別經(jīng)過(guò)測(cè)試。

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