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還原糖含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟
閱讀:3490 發(fā)布時(shí)間:2013-6-20還原糖含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:
在一系列刻度試管中,分別加入200μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6 mL,再順序加入蒸餾水2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5 及1.4 mL,配成濃度分別為0、10、20、30、40、50 及60μg/mL 的系列葡萄糖溶液。每試管加入銅試劑2mL,混勻后沸水浴中加熱10min,立即冷卻,再加入2mL 砷鉬酸試劑,振蕩兩分鐘后稀釋到20mL,用分光光度計(jì)在620nm 波長(zhǎng)下比色,測(cè)其光密度OD620nm(做一式兩份)。以糖濃度微克數(shù)為橫坐標(biāo),光密度OD620nm 為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.植物樣品中還原糖的提?。?br />將樣品洗凈,吸干其表面水分,切碎混勻,稱取1g 放入研缽中,加入約0.5g 石英砂,磨成勻漿,加水將樣品由玻璃漏斗沖入100mL 容量瓶中,加水達(dá)70~80mL,搖勻后置于80℃恒溫水浴上浸提0.5h。
待上述樣品冷卻后,沉淀蛋白質(zhì),加入5%硫酸鋅5mL,再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL,以沉淀蛋白質(zhì)。振蕩后靜置,至上層出現(xiàn)清液后再加一滴Ba(OH)2,直至無(wú)白色沉淀時(shí),向容量瓶加水至刻度。
3.還原糖含量的測(cè)定:
過(guò)濾上述已定容的樣品液,取5mL 濾液,再定容到100mL(此步視樣品的含糖量而定)。取已稀釋的溶液2mL,與標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖顯色法相同:加銅試劑2mL,煮沸10min,加砷鉬酸試劑 2mL,振蕩2mL,定容到15ml,620nm 波長(zhǎng)下比色,記下光密度OD620nm(至少重復(fù)兩次)。
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