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技術(shù)文章

大鼠胰島素試劑盒詳細操作步驟

閱讀:1692          發(fā)布時間:2013-6-14

大鼠胰島素試劑盒詳細操作步驟

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加標(biāo)準品:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準品孔,ELISA試劑盒 依次加入不同濃度的標(biāo)準品50ul(建議每個濃度做2個平行孔)人ELISA試劑盒。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。大鼠ELISA試劑盒在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻小鼠ELISA試劑盒。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘ELISA試劑盒。

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,大鼠ELISA試劑盒每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干小鼠ELISA試劑盒。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外ELISA試劑盒。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘人ELISA試劑盒.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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